[發明專利]抗人TNF-αIgY抗體及其治療皮膚疾病的應用

在審

• 申請號: 201410510412.X
• 申請日: 2014-09-28
• 公開（公告）號: CN105521489A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 葉慶煒
• 申請（專利權）人: 徐州逸仕生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/24;C07K16/02;A61P17/00;A61P17/06
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

1.一種用于治療皮膚疾病的抗人TNF-α卵黃抗體IgY。

2.權利要求1所述的抗人TNF-α卵黃抗體IgY，其通過下述方法制備、分離和純化而成：(a)用人TNF-α蛋白免疫產蛋雞，收集雞蛋；(b)分離卵黃純化獲得所述抗人TNF-α卵黃抗體IgY。

3.權利要求1或2所述的抗TNF-α卵黃抗體IgY，其通過下述方法制備、分離和純化而成：(a)100ug抗原加等體積氟氏完全佐劑乳化到滴水不化即可，于雞背部皮下多點注射，注射總體積400ul/只。一周后，第二次免疫：50ug抗原加等體積氟氏不完全佐劑乳化到滴水不化即可，于雞背部皮下多點注射，注射總體積400ul/只。第二次免疫一周后進行第三次免疫，免疫劑量和方法同第二次。第三次免疫后一周采雞翅靜脈血，分離血清。間接法ELISA測抗血清效價。收集效價達十萬以上雞蛋。(b)打破雞蛋殼，用蛋黃分離器小心分離卵黃，保證卵黃膜未破裂。將卵黃在普通濾紙翻滾數次，將卵白吸除干凈，卵黃破膜收集卵黃。用2倍卵黃體積的10mMpH7.4PBS稀釋卵黃，室溫攪拌；用3.5％PEG6000沉淀稀釋后的卵黃，10000rpm4℃離心10分鐘。離心后收集上清，經普通濾紙過濾去除不溶物；向過濾后上清中加入8.5％PEG6000，室溫攪拌20分鐘，離心棄去上清，沉淀用卵黃體積的10mMpH7.4PBS溶解。待沉淀溶解后，向其中加入12％PEG6000沉淀卵黃抗體，室溫攪拌20min；離心棄上清，沉淀用一半卵黃體積的10mMpH7.4PBS重懸溶解。在4℃條件下加入33％飽和硫酸銨，攪拌1小時，離心棄上清，沉淀用10mMpH7.4PBS1ml重懸溶解。溶解后的沉淀對PBS透析，20小時以上，每6至8小時更換透析液一次，收集透析過的抗人TNF-α卵黃抗體IgY，所述人TNF-α卵黃抗體IgY的純度為98％。

4.權利要求1至3任一項所述的抗人TNF-α卵黃抗體IgY在制備用于治療皮膚疾病的外用藥物中的用途。

5.權利要求4所述的用途，其中所述的皮膚疾病為酒糟鼻、濕疹或銀屑病等常見皮膚病。

6.一種用于治療皮膚疾病的外用藥物，其中權利要求1至3任一項所述抗TNF-α卵黃抗體IgY和藥用輔料或藥用基質。

7.權利要求6所述治療皮膚疾病的外用藥物，其中所述藥物輔料為甘油。

8.權利要求7所述治療皮膚疾病的外用藥物，其中所述抗TNF-α卵黃抗體IgY的濃度為0.5mg/ml。

9.權利要求6所述治療皮膚疾病的外用藥物，其中所述藥用基質的配方為：

10.一種用于治療牛皮癬的方法，該方法包括將所述外用制劑施用于患處，每日涂抹兩次，每次約200微升，3周為1個療程。