[發(fā)明專利]抗人TNF-αIgY抗體及其治療皮膚疾病的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410510412.X
• 申請日: 2014-09-28
• 公開（公告）號: CN105521489A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 葉慶煒
• 申請（專利權）人: 徐州逸仕生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/24;C07K16/02;A61P17/00;A61P17/06
• 代理公司: 北京匯澤知識產(chǎn)權代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域。本發(fā)明涉及抗人腫瘤壞死因子α(TNF-α)卵黃抗體IgY及 其制備方法，含其藥物組合物，以及其治療皮膚疾病的應用。

發(fā)明背景

酒糟鼻(Rosacea)、濕疹(Eczema)、銀屑病(Psoriasis)是常見的、多發(fā)的皮膚疾 病。本發(fā)明者繼ZL97112184.2和ZL99119812.3后，進一步證明，酒糟鼻、濕疹、銀屑病等 皮膚炎癥性疾病均與局部皮膚組織內(nèi)的“細胞因子風暴”(CytokineStorm)相關。應用抗 細胞因子(IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-23、TNF-α、MCP-1等)及其受體的抗體 制成外用藥，能進入炎癥皮膚組織，中和、排除皮膚組織內(nèi)過量表達和分泌的炎癥因子，阻 斷和抑制“細胞因子風暴”，有效地治療各種皮膚炎癥性疾病。

酒糟鼻、濕疹、銀屑病患者中，腫瘤壞死因子-α過度表達，其中患者皮損區(qū)的TNF-α比 皮損區(qū)周圍正常皮膚表皮及正常人皮膚表皮的TNF-α顯著增高。患者外周血單核細胞(PBMC) 中TNF-αmRNA的表達與正常人對照，使用半定量逆轉錄-多聚酶聯(lián)反應來檢測，發(fā)現(xiàn)酒糟鼻、 濕疹和銀屑病患者PBMC中TNF-αmRNA表達顯著增高，為了排除TNF-α基因表達的影響，用 高度敏感的酶聯(lián)免疫吸附法只測定TNF-α三聚體分子活性，發(fā)現(xiàn)患者血漿中TNF-α水平顯 著增高。

TNF-α的生物學活性主要是通過細胞膜上的特異性受體傳遞信號而實現(xiàn)的。TNF-α受體 有兩種，即相對分子量分別為55000的TNF-RI(CD120α)和75000的TNF-RII(CD120β)，該兩 種TNF受體均為糖蛋白，氨基酸順序分析顯示兩類受體胞外區(qū)域的氨基酸序列高度相似，但是 胞內(nèi)區(qū)域則完全不同。由于他們的不同信號傳遞機制，二者除分子量不同外，在配體結合力、 糖基化程度、免疫反應性和蛋白水解肽鏈圖譜學方面均有差異。TNF-RI引起的作用非常廣泛， 它包括殺傷細胞活性、抗病毒活性、誘導Mn-SOD、ICAM-1及IL-6的表達、促進成纖維細胞增 殖以及細胞程序化死亡、激活NF-KB等多種生物學、活性物質(zhì)的信號傳遞。TNF-RII主要傳遞 胸腺細胞和NK等淋巴細胞的增殖信號，通過促進TNF-α結合TNF-RI而增加TNF-RI誘導的作用， 同時也增加ICAM-1的表達。

TNF-α是與皮膚免疫炎癥反應密切相關的重要細胞因子之一，TNF-α不僅能夠誘導皮膚 內(nèi)粘附分子的表達，促進淋巴細胞的浸潤，加速朗格罕氏細胞的成熟，增強其活化T細胞的 能力，而且還能夠促進角質(zhì)形成細胞的增殖。TNF-α的兩個受體皆以可溶性形式存在細胞表 面。TNF-α必須與細胞表面的受體結合才能激活細胞信號轉導，發(fā)揮促炎癥及免疫調(diào)節(jié)等方 面的作用。

傳統(tǒng)上治療皮膚炎癥疾病廣泛選用抗生素類或激素類藥物，這些藥物長期使用會讓患者 產(chǎn)生依賴性；而且激素會破壞患者的免疫系統(tǒng)和抵抗力，對患者的身體健康有很大的副作用 并且不能從根本達到治愈疾病的目的。綜上所述，TNF-α是導致皮膚免疫炎癥反應關鍵的細 胞因子之一，我們利用生物技術制備了抗人TNF-α卵黃抗體IgY，較治療銀屑病的單抗制劑 更好，因為多克隆的卵黃抗體能識別更多TNF-α靶分子位點，親和力更好。本發(fā)明旨在通過 特異性的抗人TNF-α卵黃抗體IgY與TNF-α特異性結合，阻斷其與TNF受體結合而達到中 和TNF-α的生物活性，從根本上阻止其下游促炎癥等作用，最終達到治療皮膚炎癥的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供能用于治療酒糟鼻、濕疹和銀屑病等常見皮膚病的抗體。

酒糟鼻、濕疹和銀屑病等皮膚疾病發(fā)病機理是皮膚組織內(nèi)發(fā)生的″細胞因子風暴″ (CytokineStorm)引起的。抗細胞因子(炎癥因子)抗體能有效中和、排除皮膚組織內(nèi) 過量表達和分泌的炎癥因子，阻止和消除″細胞因子風暴″，從而有效地治療多種皮膚疾病。 卵黃抗體為多克隆抗體，能識別″靶″分子上多個結合位點，較單克隆抗體(識別單個結合位 點)具有更高的生物活性和治療效果。而且，卵黃對人體皮膚外用，無毒副作用。

一方面，本發(fā)明提供了一種能有效治療皮膚疾病的抗TNF-α卵黃抗體IgY。