[發(fā)明專利]一種基于金核-銀衛(wèi)星手性組裝體的赭曲霉毒素A的超靈敏檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410510264.1 | 申請日： | 2014-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN104237136A | 公開（公告）日： | 2014-12-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐麗廣;趙雪利;胥傳來;匡華;馬偉;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | G01N21/19 | 分類號： | G01N21/19 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 衛(wèi)星 手性 組裝 曲霉 毒素 靈敏 檢測 方法 | ||
1.一種基于金核-銀衛(wèi)星手性組裝體的赭曲霉毒素A的檢測方法：
（一）檢測傳感器的構(gòu)建
（1）金納米粒子上修飾適配體OTA-aptamer
35?nm?粒徑的金納米粒子采用13?nm的金種子生長合成；35?nm?粒徑的金納米粒子離心濃縮10倍后用10mM?pH7.2的磷酸鹽緩沖液重懸，加入巰基化的OTA-aptamer使得終濃度為5μM；DNA與金納米粒子的摩爾比為300︰1，室溫孵育2h后加NaCl至50mM，之后每隔1h加一次NaCl，至NaCl終濃度300mM；溶液老化24h后離心3次去除未結(jié)合的DNA，10mM?Tris-HCl重懸待用；
OTA-aptamer：?5’-SH-TTTTTTTTTT?GATCGGGTGT?GGGTGGCGTA?AAGGGAGCAT?CGG-3’；
（2）銀納米粒子上修飾適配體部分互補序列OTA-C
采用硼氫化鈉還原硝酸銀的方法合成粒徑為8nm的銀納米粒子；銀納米粒子離心濃縮10倍用10mM?pH8的Tris-HCl重懸，加入OTA的巰基化部分互補序列OTA-C使得終濃度為0.5μM，室溫孵育過夜；OTA-C與銀納米粒子的摩爾比為5︰1；離心去除未結(jié)合的DNA，用Tris-HCl重懸待用；
OTA-C：5’-SH-?TTTTTTTTTT?CCGATGCTCC?CT-3’；
（3）金核-銀衛(wèi)星結(jié)構(gòu)的組裝
30μL?OTA-aptamer適配體修飾的金納米粒子與150μL?OTA-C適配體部分互補序列修飾的銀納米粒子混合，室溫孵育8h，得金核-銀衛(wèi)星結(jié)構(gòu)的組裝體混合液；
（二）圓二色譜檢測，建立金銀手性疊加信號與赭曲霉毒素A的濃度的標準曲線
六個不同濃度的赭曲霉毒素A標準品：0，10，20，100，200，500?pg/mL溶在水中；20μL標準品溶液與180μL步驟（3）的金核-銀衛(wèi)星結(jié)構(gòu)的組裝體混合液混合，室溫孵育8h；
反應結(jié)束后測圓二色譜CD，∑CD＝?CD400?nm?+?CD527?nm，以?∑CD為信號建立與赭曲霉毒素A濃度的標準曲線，赭曲霉毒素A的濃度為橫坐標，∑CD為縱坐標。
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