[發明專利]固相合成胸腺肽α1在審

申請號：	201410509534.7	申請日：	2014-09-28
公開（公告）號：	CN104327181A	公開（公告）日：	2015-02-04
發明（設計）人：	白俊才;張國慶;張若平	申請（專利權）人：	上海昂博生物技術有限公司
主分類號：	C07K14/575	分類號：	C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
代理公司：	上海專利商標事務所有限公司 31100	代理人：	張睿
地址：	201417 上海市奉***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	相合胸腺肽
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及醫藥多肽類原料藥的化學合成，尤其涉及一種高溫下固相合成胸腺肽α1。

背景技術

胸腺肽α1是一種化學合成藥物，有廣泛的臨床應用的非特異性免疫調節劑。目前胸腺肽α1的合成與制備方法主要有生物化學提取法、基因工程法和化學固相合成法，Genen?tech公司公布了關于胸腺肽α1的基因重組方法：以化學合成的DNA與大腸桿菌trpE基因連接職稱融合蛋白，通過精制分離，再用溴化氣處理，將切下來的肽經過乙?；芍频眯叵匐摩?，基因工程方法的難點是高效表達，且所用費用昂貴。

專利CN201110186259.6采用的是固相合成技術，以CTC樹脂為載體，采用HATU和NMM為激活試劑，在含有三氟乙酸/二巰基乙醇/水的溶液中裂解，用乙醚為沉降液得到胸腺肽α1粗品，最后用不同的反相C18填料進行兩次純化得到胸腺肽α1純品。

專利US2009/0171068A1公布了一種固相多肽合成方法，采用PEG樹脂為載體，Fmoc保護氨基酸為原料合成胸腺肽α1粗品?！兜|師專學報》1999年04期《Fmoc固相合成胸腺肽α1的工藝研究》描述了一種以Fmoc－Asn(Trt)－WangRisin為多肽合成起點，在羥基樹脂上進行逐個延伸的縮合接肽反應，最終合成胸腺素α1的多肽序列，將其用50％TFA酸解脫離樹脂得粗產品。

這些合成方法都在常溫下進行(10-30℃)，一個氨基酸的脫保護過程至少需要30分鐘，縮合反應需要至少2小時，雖然耗時長，產率卻低，方法成本高。在高溫下進行固相多肽合成能使反應時間減少，但是會增加副反應，尤其會產生明顯的差向異構化現象。

因此，本領域迫切需要提供一種既能縮短反應時間，同時又能避免副反應發生、產率較高的固相合成胸腺肽α1的方法。

發明內容

本發明旨在提供一種胸腺肽α1的固相合成方法。

本發明提供了一種胸腺肽α1的固相合成方法，所述方法包括步驟：

以固相合成樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸或多肽，獲得保護的二十八肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團，用縮合劑進行接肽反應，得保護的二十八肽樹脂后，同步進行脫側鏈保護基團及切肽，獲得胸腺肽α1，所述方法在35-85℃下進行。

在另一實施例中，所述方法在40-80℃下進行。

在另一實施例中，所述方法在45-70℃下進行。

在另一實施例中，所述方法在50-60℃下進行。

在另一優選例中，所述方法在35-59℃和在61-85℃下進行。

在另一優選例中，進行縮合時的溶劑是二甲基甲酰胺(DMF)；所述縮合劑為DIC/HOBt。

在另一優選例中，脫去Fmoc-保護基團的時間為20秒-4分鐘；更佳地，連續兩次脫去Fmoc-保護基團，一次進行20-40秒，一次2-4分鐘。