[發明專利]鏈霉菌菌株及其防治黃瓜枯萎病聯合應用

在審

• 申請號: 201410509460.7
• 申請日: 2014-09-29
• 公開（公告）號: CN104342389A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 馬正;俞曉平;路丹丹;羅帥;邊亞琳;許益鵬;王正亮;申屠旭萍
• 申請（專利權）人: 中國計量學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/47;C12R1/465
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，涉及兩株生防放線菌—白色鏈霉菌2013和暗黑鏈霉菌M929代謝產物在防治黃瓜枯萎病中的應用。

技術背景

黃瓜枯萎病，又名萎蔫病、死秧病，是黃瓜病害中最為嚴重、造成經濟損失最大的病害之一。近年來黃瓜枯萎病的發生逐年加重，一般可導致黃瓜產量減少10%~20%，病情嚴重時損失達70%以上，給生產造成巨大損失。

黃瓜枯萎病的病原菌為尖孢鐮刀菌黃瓜專化型Fusarium?oxysporum?f.?sp.?Cucumerinum，該病菌在土壤、病株殘體及未腐熟的農家肥中或附著在種子上越冬，成為翌年初侵染源。病原菌從根部傷口和根毛生長點侵入植株，進而破壞其根、莖和葉的維管束，使黃瓜植株吸收和運輸水分功能喪失，最終造成黃瓜植株枯萎死亡。針對黃瓜枯萎病害目前主要采用化學農藥殺滅病原菌，但化學防治導致農藥殘留、環境污染及抗藥性等一系列問題。因此，生物防治引起人們的重視。目前有研究表明植物提取物中的活性成分對有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步驟多，效率低（賈俊英，中國農學通報，2014；鄭成銳，中國園藝文摘，2011；李杰，科技導報，2014）；已報道采用芽孢桿菌作為生防菌防治黃瓜枯萎病病害的發生，由于該菌株對病原菌的抑制作用不強，故生防效果并不理想（韋巧婕，南京農業大學學報，2013；卜春亞，中國農學通報，2013）。放線菌因其易產生抗病原菌成分等活性物質，已成為生物防治植物病蟲害的主要資源和生物農藥開發的主要來源。土壤是放線菌棲居的重要場所，從土壤中獲得具有高效抗菌活性的放線菌是目前世界范圍內研制開發新醫藥和新農藥必不可少的基礎工作。從土壤中篩選拮抗放線菌對黃瓜枯萎病原菌的生物防治已有不少報道，但大多集中在用單一拮抗放線菌的發酵產物防治黃瓜枯萎病，治療和預防效果并不顯著。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于通過篩選提供對黃瓜枯萎病原菌具有較強拮抗作用的兩株生防菌—白色鏈霉菌2013和暗黑鏈霉菌M929。

本發明的第二個目的是通過不同的比例混合兩株生防鏈霉菌的發酵產物，提供上述白色鏈霉菌和暗黑鏈霉菌在黃瓜枯萎病防治中的聯合應用。

本發明的目的是通過以下技術手段得以實現：

本發明首先以在浙江西溪濕地植物根際采集的土樣為研究對象，經分離、發酵培養、發酵液提取以及對植物病原真菌抑制活性檢測等步驟獲得兩株對黃瓜枯萎病原菌具有較強抑菌活性的鏈霉菌；其中一株經微生物分類學鑒定并命名為白色鏈霉菌（Streptomyces?albus）2013。該菌已于2013年6月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?NO:?M?2013269；另一株經微生物分類學鑒定并命名為暗黑鏈霉菌（Streptomyces?tenebrarius）M929，該菌已于2013年12月25日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:?M?2013710。中國典型培養物保藏中心地址：武漢市武昌珞珈山，郵編：430072。

本發明所述的白色鏈霉菌（Streptomyces?albus）2013在PDA固體培養基上培養時氣絲白色，基絲地衣狀，乳脂色。顯微觀察發現Streptomyces?albus?2013孢子絲螺旋形，孢子球形至卵圓形，表面光滑。本發明所述的Streptomyces?albus?2013，發酵液經提取濃縮后可對黃瓜枯萎病病原真菌具有較強的抑制作用。

本發明所述的暗黑鏈霉菌（Streptomyces?tenebrarius）M929在PDA固體培養基上培養時氣絲暗鼠灰色，基絲地衣狀，黑色。顯微觀察發現Streptomyces?tenebrarius?M929孢子絲敞圈，?孢子球形至卵圓形，表面光滑。本發明所述的Streptomyces?tenebrarius?M929，發酵液經提取濃縮后可對黃瓜枯萎病病原真菌具有較強的抑制作用。

所述的黃瓜枯萎病原菌拮抗放線菌的篩選和抑菌活性檢測過程如下所述：

(1)?從野外（浙江省西溪濕地植物根際）采集土樣，并進行晾干處理；

(2)?從土樣中分離放線菌，并利用黃瓜枯萎病原菌作為指示菌篩選具有拮抗作用的放線菌；