[發(fā)明專(zhuān)利]鏈霉菌菌株及其防治油菜菌核病聯(lián)合應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410509418.5
• 申請(qǐng)日: 2014-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104312948A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬正;俞曉平;路丹丹;羅帥;邊亞琳;王正亮;申屠旭萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)計(jì)量學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/59;C12R1/485
• 代理公司: 杭州求是專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及兩株生防放線菌—龜裂鏈霉菌M527和金色鏈霉菌M930代謝產(chǎn)物在防治油菜菌核病中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

油菜，原產(chǎn)我國(guó)，南北均有種植。油菜為低脂肪蔬菜，且含有膳食纖維，因此具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥效功能。油菜菌核病菌（Sclerotinia?sclerotiorum（Lib.）de?Bary）引起的油菜菌核病是世界范圍內(nèi)的一種病害，在我國(guó)居油菜3大病害之首，菌核病主要危害莖稈，引起植株早枯，角果減少，種子皺癟，千粒重和出油率降低，產(chǎn)量下降，是影響油菜產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素之一。該病在我國(guó)長(zhǎng)江中下游油菜主產(chǎn)區(qū)發(fā)生尤為嚴(yán)重，常年株發(fā)病率高達(dá)10%—30%。目前主要采用的防治措施以噴施化學(xué)農(nóng)藥苯丙咪唑類(lèi)或二甲酰亞胺等化學(xué)防治方式為主，這些化學(xué)藥劑的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致了環(huán)境污染、人畜中毒等問(wèn)題，引起了人們的普遍關(guān)注。因此，生物防治引起人們的重視。在天然產(chǎn)物中,?植物源農(nóng)藥的研究與開(kāi)發(fā)最為人們所關(guān)注目前有研究表明植物提取物中的活性成分對(duì)有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步驟多，效率低，但未見(jiàn)應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)；放線菌因其易產(chǎn)生抗病原菌成分等活性物質(zhì)，已成為生物防治植物病蟲(chóng)害的主要資源和生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)的主要來(lái)源。國(guó)內(nèi)外在生物防治油菜菌核病方面已報(bào)道有抑制作用的大多為真菌和細(xì)菌，如木霉、熒光假單胞菌和芽孢桿菌，從土壤中篩選拮抗放線菌對(duì)油菜菌核病原菌的生物防治報(bào)道還并不多見(jiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于通過(guò)篩選提供對(duì)油菜菌核病原菌具有較強(qiáng)拮抗作用的兩株生防菌—菌龜裂鏈霉菌M527和金色鏈霉菌M930。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是通過(guò)不同的比例混合兩株生防鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物，提供上述菌龜裂鏈霉菌和金色鏈霉菌在油菜菌核病防治中的聯(lián)合應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)手段得以實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明首先以在山東省泰安市郊區(qū)鹽堿地采集的土樣為研究對(duì)象，經(jīng)分離、發(fā)酵培養(yǎng)、發(fā)酵液提取以及對(duì)植物病原真菌抑制活性檢測(cè)等步驟獲得兩株對(duì)油菜菌核病原菌具有較強(qiáng)抑菌活性的鏈霉菌；其中一株經(jīng)微生物分類(lèi)學(xué)鑒定并命名為龜裂鏈霉菌（Streptomyces?rimosus）M527。該菌已于2013年6月19日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為：CCTCC?NO:?M?2013270；另一株經(jīng)微生物分類(lèi)學(xué)鑒定并命名為金色鏈霉菌（Streptomyces?aureofaciens）M930，該菌已于2013年12月25日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO:?M?2013711。中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心地址：武漢市武昌珞珈山，郵編：430072。

本發(fā)明所述的龜裂鏈霉菌（Streptomyces?rimosus）M527在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)氣絲白色至灰色，基絲乳脂色。顯微觀察發(fā)現(xiàn)Streptomyces?rimosus?M527孢子絲初旋至螺旋形。孢子長(zhǎng)圓形至柱形，表面光滑。本發(fā)明所述的Streptomyces?rimosus?M527，發(fā)酵液經(jīng)提取濃縮后可對(duì)油菜菌核病病原真菌具有較強(qiáng)的抑制作用。

本發(fā)明所述的金色鏈霉菌（Streptomyces?aureofaciens）M930在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)氣絲白色，基絲褐色。顯微觀察發(fā)現(xiàn)Streptomyces?aureofaciensM930孢子絲緊密螺旋形，孢子卵圓形，表面光滑。本發(fā)明所述的Streptomyces?aureofaciens?M930，發(fā)酵液經(jīng)提取濃縮后可對(duì)油菜菌核病病原真菌具有較強(qiáng)的抑制作用。

所述的油菜菌核病原菌拮抗放線菌的篩選和抑菌活性檢測(cè)過(guò)程如下所述：

(1)?從野外（山東省泰安市郊區(qū)鹽堿地）采集土樣，并進(jìn)行晾干處理；

(2)?從土樣中分離放線菌，并利用油菜菌核病原菌作為指示菌篩選具有拮抗作用的放線菌；

(3)?將長(zhǎng)出的放線菌分別點(diǎn)種于混有油菜菌核病原菌孢子懸液（1×10⁶?cfu·mL^-1）的PDA平板上，通過(guò)觀察抑菌圈大小，挑選抑菌圈較明顯的菌株進(jìn)入復(fù)篩；

(4)?將選取的菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵結(jié)束后離心收集發(fā)酵液，用乙酸乙酯萃取，真空減壓濃縮后制備浸膏，用于油菜菌核病的防效檢測(cè)，由此篩選出防治效果較好的兩株拮抗微生物—龜裂鏈霉菌M527和金色鏈霉菌M930。

本發(fā)明的有益效果：