[發(fā)明專利]用于基于血液樣品構建測序文庫的方法及其在確定胎兒遺傳異常中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410505310.9
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN105400864B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設計）人: 張艷艷;陳芳;蔣慧;郭宇來;曾鵬;徐訊;楊煥明;丹尼斯·G·博林格;弗拉迪米爾·I·巴什基洛夫;海曼舒·塞西
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12M1/34;C12M1/00;C40B50/06;C40B60/14
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

本發(fā)明提供了一種基于血液樣品構建測序文庫的方法、一種核酸測序方法、一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的方法、一種基于血液樣品構建測序文庫的裝置、一種核酸測序設備以及一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的系統(tǒng)提供了一種基于血液樣品構建測序文庫的方法、一種核酸測序方法、一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的方法、一種基于血液樣品構建測序文庫的裝置、一種核酸測序設備以及一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的系統(tǒng)。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學領域，具體的，本發(fā)明涉及用于基于血液樣品構建測序文庫的方法及其在確定胎兒遺傳異常中的用途。更具體的，本發(fā)明涉及提供了一種基于血液樣品構建測序文庫的方法、一種核酸測序方法、一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的方法、一種基于血液樣品構建測序文庫的裝置、一種核酸測序設備以及一種用于確定樣品中胎兒遺傳異常的系統(tǒng)。

背景技術

高通量測序已經(jīng)成為了現(xiàn)代分子生物學、生物技術、醫(yī)學等多領域的基礎之一。在近幾年，對迅速、精確、經(jīng)濟的基因表達水平和核苷酸序列的測定方法的研究不斷推陳出新；以邊合成邊測序為基本原理的第二代高通量測序技術已趨于成熟，各大測序公司紛紛將重點放在了新測序產(chǎn)品的開發(fā)、測序流程的縮短和成本降低上。目前已有的基于第二代測序技術的測序產(chǎn)品有全基因組重測序、全轉(zhuǎn)錄組測序、小分子RNA測序等。特別的，第二代測序結合微陣列技術而衍生出來的應用--目標序列捕獲測序技術能夠使用大量寡核苷酸探針與基因組上的特定區(qū)域互補結合，從而富集到特定區(qū)段，然后用第二代測序技術對這些區(qū)段進行測序，以實現(xiàn)人全外顯子組測序(WES)。這種測序方式數(shù)據(jù)分析壓力小，較之全基因組測序有明顯優(yōu)勢。

然而，目前關于核酸測序的相關技術仍有待改進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一。

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種基于血液樣品構建測序文庫的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括：

從所述血液樣品分離DNA樣品；

對所述DNA樣品進行去磷酸化處理以便獲得經(jīng)過去磷酸化的DNA；

對所述經(jīng)過去磷酸化的DNA進行末端修復，以便獲得雙鏈DNA片段，其中，所述雙鏈DNA片段具有兩個平端末端，并且四個末端核苷酸均缺少磷酸基團；

將相互不同的第一和第二接頭與所述雙鏈DNA片段相連，以便獲得第一連接產(chǎn)物，其中第一和第二接頭的每一個均是分離的寡核苷酸，所述分離的寡核苷酸包括：第一鏈，所述第一鏈的5’末端核苷酸具有磷酸基團，并且所述第一鏈的3’末端核苷酸為雙脫氧核苷酸；以及第二鏈，所述第二鏈的5’末端核苷酸不具有磷酸基團，并且所述第二鏈的3’末端核苷酸為雙脫氧核苷酸，其中，所述第一鏈的長度大于所述第二鏈的長度，并且所述第一鏈和所述第二鏈之間形成雙鏈結構；

利用第一單鏈DNA置換所述第一接頭的第二鏈，利用第二單鏈DNA置換所述第二接頭的第二鏈，以便獲得第二連接產(chǎn)物，其中，第一單鏈DNA適于與第一接頭的第一鏈形成雙鏈結構，所述第二單鏈DNA適于與第二接頭的第一鏈形成雙鏈結構；

利用第一引物和第二引物對所述第二連接產(chǎn)物進行擴增，其中，所述第一引物包括與所述第一單鏈DNA和第二單鏈DNA之一相同的序列，所述第二引物包括與所述第一單鏈DNA和第二單鏈DNA的另一個相同的序列，并且所述第一引物和第二引物之一具有額外的生物素標記，所述擴增產(chǎn)物是在兩個末端分別具有一個接頭的DNA片段；

從所述在兩個末端分別具有一個接頭的DNA片段分離單鏈DNA片段；以及

將所述單鏈DNA片段進行環(huán)化處理，以便獲得單鏈環(huán)狀DNA，所述單鏈環(huán)狀DNA構成所述測序文庫。