[發明專利]體液中乳糖測定方法

有效

• 申請號: 201410504960.1
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104237147A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 李立和;常玉芝;丁弘
• 申請（專利權）人: 天津市寶坻區人民醫院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種體液中乳糖測定方法，其特征在于工具酶及指示酶同在試劑I中，試劑II中僅有乳糖酶有效成分；其測定方法為：體液中葡萄糖先與試劑Ⅰ于37℃溫浴3～5分鐘，體液中葡萄糖與試劑Ⅰ的反應生成NADPH，加入試劑Ⅱ后于37℃溫浴4～7分鐘，乳糖水解后生成L-半乳糖和葡萄糖，葡萄糖經反應也生成NADPH；儀器在334～340nm波長處檢測，以試劑Ⅰ反應產生的NADPH為空白，由試劑Ⅱ反應產生的NADPH計算出乳糖的含量，計算公式為：

OD_乳糖?=?OD_2?-?OD₁×[（SV+R₁V₁?）/?(SV+R₁V₁?+R₂V₂)]

乳糖濃度=?F×OD_乳糖

其中OD_乳糖是乳糖產生的吸光度，OD₁是樣品加入試劑Ⅰ反應后測得的吸光度，OD₂反應液加入試劑Ⅱ反應后測得的吸光度，SV是樣品的體積，R₁V₁是試劑Ⅰ的體積，R₂V₂是試劑Ⅱ的體積，F是校正因數。

2.根據權利要求1所述的體液中乳糖測定方法，其特征在于試劑Ⅰ中含有三磷酸腺苷、己糖激酶、NADP、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；試劑Ⅱ中僅含有乳糖酶有效成分。

3.根據權利要求1所述的體液中乳糖測定方法，其特征在于試劑Ⅰ每升三乙醇胺鹽酸緩沖液內含三乙醇胺30?mmol～70?mmol、硫酸鎂1.0??mmol～3.0?mmol、三磷酸腺苷2.0?mmol～4.0?mmol、NADP?2.0?mmol～4.0?mmol、己糖激酶?6000U～10000U、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶10000U～20000U、Proclin-300防腐劑100μl～300μl；試劑Ⅱ每升三乙醇胺鹽酸緩沖液內含三乙醇胺30?mmol～70?mmol、乳糖酶1500～2500U、Proclin-300防腐劑100μl～300μl。

4.根據權利要求1所述的體液中乳糖測定方法，其特征在于試劑Ⅰ和試劑Ⅱ中三乙醇胺鹽酸緩沖液的pH值為7.5±0.2。

5.根據權利要求1所述的體液中乳糖的測定方法，其特征在于測定的體積比為：?樣品∶試劑I∶試劑II=1∶60～90∶20～30。