[發明專利]一種C肽單克隆抗體交聯磁微粒及其制備方法和包括其的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410504841.6
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104215778A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 陳超;李基;彭波;孫小禁
• 申請（專利權）人: 上海科華生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/553
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

技術領域

本發明涉及體外診斷醫學檢驗領域。具體地說，本發明涉及一種C肽單克隆抗體交聯磁微粒及其制備方法和包括其的C肽檢測試劑盒。

背景技術

C肽是胰臟中β胰島細胞合成的胰島素原的一部分，在從胰島細胞分泌之前，胰島素原大多以一個86分子氨基酸的多肽形式存在，其中包括由兩個胱氨酸連接的多肽，一個是51個氨基酸分子的胰島素，分別是21個氨基酸的A鏈和30個氨基酸的B鏈，另一個是30個氨基酸分子的C肽以及兩外兩個2肽。

C肽和胰島素是等量分泌的，但是C肽在血液中的濃度卻遠遠高于胰島素。主要原因有以下幾點：(1)C肽不同于胰島素，它不經過肝臟代謝而是經過腎臟被排出體外并且C肽在體內能發生的交叉反應非常少；(2)C肽的半衰期為大于30分鐘而胰島素的半衰期只有5～7分鐘；(3)胰島素易受溶血影響使得測量結果會降低，但是從至今報到來看并未發現C肽也受到溶血的影響。

C肽的正常水平在每個個體中都是不一樣的，甚至存在很大差異。C肽水平因個體的性別、BMI、腰圍與臀圍的比率、血清甘油三酯、總膽固醇量、尿酸等呈正相關；與年齡、吸煙情況及高密度脂蛋白膽固醇呈負相關。

C肽的測量有著很多的用途及意義，包括：(1)作為一種精確的指標去評估糖尿病人的剩余胰島β細胞的功能以及胰島素分泌的水平；(2)用來診斷胰島素瘤或者內源性高胰島素血癥；(3)區分非天然低血糖癥和由于胰島素功能亢進引起的低血糖；(4)在某些情況下可以用來區分I型糖尿病和II型糖尿病；(5)為糖尿病病人治療方案的確定提供指導。

目前臨床上C肽的檢測方法主要有放射免疫分析法(RIA)、酶聯免疫分析法(ELISA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)、化學發光免疫分析法(CLIA)等。RIA方法由于試劑具有放射性，對操作者具有一定危害性，且操作復雜，試劑有效期短等缺點，早已不推薦作為C肽臨床診斷；ELISA法的缺點在于無法準確進行定量，且批間差異較大，線性范圍有限，無法持續監控患者C肽水平；TRFIA雖然測值較為準確，但依然存在反應時間較長，對環境要求較高，容易受空氣塵埃影響，且多為96人份/盒，使用稀土標記物等缺點也使得此免疫方法無法大規模使用；CLIA法是一種較為先進的免疫學方法，具有反應時間短、靈敏度高、特異性好、線性范圍寬、重復性好等優點，標記物穩定性好，在保證檢測速度的前提下，也能達到檢測高通量。根據目前C肽臨床的應用情況，市場應用前景最好且診斷最可靠的方法學為CLIA法。

雖然目前中國市場上已有注冊批準的C肽化學發光免疫分析法測定試劑盒，但多為進口試劑，成本較高，且試劑盒的制備方法和相關材料均作為保密資料，未被公開，不利于C肽檢測在社區基層醫院的推廣。國產C肽試劑盒重復性較差，批間差異難控，且靈敏度較低，交叉反應率較高，臨床應用前景較差。

目前的使用的C肽檢測試劑盒中利用C肽單克隆抗體交聯磁微粒，在制得C肽單克隆抗體交聯磁微粒后，往往需要對該交聯磁微粒作封閉處理，以便封閉磁微粒上未與C肽單克隆抗體交聯的活性位點，從而降低檢測過程中的非特異性結合。在現有技術中，通常采用牛血清白蛋白(BSA)對C肽單克隆抗體交聯磁微粒作封閉處理。此外，目前使用的C肽檢測試劑盒中需要對C肽酶試劑進行稀釋的稀釋液，但稀釋液對于C肽酶試劑的穩定性也存在影響。目前，現有技術中的C肽檢測試劑盒存在非特異性結合、靈敏度不夠高、抗干擾性不強、以及檢測結果穩定性不好等等缺點。現有的磁微粒在交聯后直接用一些無關蛋白(如BSA)進行洗滌、封閉，但BSA存在批間差異，不同的BSA的特異性也各不相同，通過BSA直接封閉往往不能完全達到理想的封閉效果。

因此，本領域急需一種具有檢測靈敏度高、特異性好、非特異性結合低、重復性高等優點的C肽檢測試劑盒。

發明內容

本發明的目的是提供一種C肽單克隆抗體交聯磁微粒及其制備方法和包括所述C肽單克隆抗體交聯磁微粒的C肽檢測試劑盒。

本發明的另一目的是提供包含海藻糖的C肽酶結合物的稀釋劑，該稀釋劑能夠提高酶結合物的穩定性。

在第一方面，本發明提供一種C肽單克隆抗體交聯磁微粒，所述C肽單克隆抗體在與磁微粒交聯后，利用非離子表面活性劑進行了預處理。

在優選的實施方式中，所述C肽單克隆抗體交聯磁微粒在經非離子表面活性劑預處理后再進行封閉處理；優選地，利用BSA作封閉處理。