[發明專利]用于rs8099917單核苷酸多態性的直接熒光PCR檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201410504522.5
• 申請日: 2014-09-27
• 公開（公告）號: CN104293933B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 曹亦菲;郭興中
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司33201
• 代理人: 黃美娟,李世玉

1.一種用于rs8099917單核苷酸多態性的直接熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括檢測PCR試劑、陽性對照PCR試劑和陰性對照PCR試劑，所述檢測PCR試劑包括單核苷酸多態性rs8099917位點的特異性引物1和引物2、探針1和PCR?Mixture1；所述陽性對照PCR試劑包括陽性質控品、引物3、引物4、TaqMan探針2和PCR?Mixture2，所述陽性質控品為rs8099917位點野生型和突變型質粒混合液；所述陰性對照PCR試劑包括陰性質控品、引物5、引物6、TaqMan探針3和PCR?Mixture3，所述陰性質控品為rs8099917位點野生型質粒溶液；所述PCR?Mixture1包括PCR緩沖液、dNTPs、BSA、MgCl₂、Taq?22B?DNA聚合酶和雙蒸水，所述PCR?Mixture2和PCR?Mixture3的組成同PCR?Mixture1；

引物1、引物3和引物5均為：5’-ACATACAACATGGAGAGTTAAAG-3'；

引物2和引物6均為：5’-TGGTTCCAATTTGGGTGgC-3'；

引物4為：5’-TGGTTCCAATTTGGGTGgA-3'；

TaqMan探針1、TaqMan探針2和TaqMan探針3均為：

5’-FAM-AAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGG-BHQl-3’；

野生型質粒的序列為：

GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATT

TGTCACTGTTCCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATTTCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAAT

TTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA；

突變型質粒的序列為：

GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATT?TGTCACTGTT

CCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATG

TCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAATTTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA。

2.如權利要求1所述試劑盒，其特征在于所述PCR?Mixture?1組成為：Taq22B?1.5μL，dNTPs?2μL，Mg²⁺2μL，BSA?1μL，PCR緩沖液2.5μL，雙蒸水12.6μL～4.6μL。

3.如權利要求1所述試劑盒，其特征在于所述檢測PCR試劑的組成為：

PCR?Mixture?1為21.6μL～13.6μL，引物1為0.5μL、引物2為0.5μL、TaqMan探針1為0.4μL，雙蒸水補足至25μL；所述PCR?Mixture?1組成為：Taq22B?1.5μL，dNTPs?2μL，Mg²⁺2μL，BSA?1μL，PCR緩沖液2.5μL，雙蒸水12.6μL～4.6μL。

4.如權利要求1所述試劑盒，其特征在于所述陽性對照PCR試劑的組成為：PCR?Mixture2為21.6μL～13.6μL，引物3為0.5μL、引物4為0.5μL、TaqMan探針2為0.4μL，陽性質控品2μL～10μL，雙蒸水補足至25μL；所述PCR?Mixture?2組成為：Taq22B?1.5μL，dNTPs?2μL，Mg²⁺2μL，BSA?1μL，PCR緩沖液2.5μL，雙蒸水12.6μL～4.6μL。