[發明專利]抗雞傳染性喉氣管炎病毒轉移因子的制備方法

在審

• 申請號: 201410503521.9
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN105497867A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 陳慶忠;安同偉;劉芳
• 申請（專利權）人: 天津嘉瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/02
• 分類號: A61K38/02;C07K1/34;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物制劑領域，尤其是一種抗雞傳染性喉氣管炎病毒轉移因 子的制備方法。

背景技術

雞傳染性喉氣管炎(ILT)是由雞傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)引起的雞的 一種急性接觸性呼吸道傳染病。雞傳染性喉氣管炎按癥狀表現可分為喉氣管 炎型和眼型，雛雞發病多表現為眼型。該病以呼吸困難、咳嗽和咳出血樣滲 出物或黃色干酪樣假膜為特征，受侵害的氣管粘膜腫脹、水腫，導致糜爛和 出血，發病率接近100％，死亡率50％～70％，蛋雞產蛋量明顯下降。給養禽 業造成了巨大的損失，是集約化養雞場的重要疫病之一。

喉氣管炎型的病雞表現為精神沉郁、食欲下降、流涕、有濕啰音，呼吸 極為困難，病雞雞冠、肉髯紫紅色，排灰白色、綠色糞便、產蛋雞產蛋率下 降。眼型病雞表現為流鼻涕，眼瞼紅腫，有泡沫樣分泌物，眼內有漿液性或 膿性分泌物，上下眼瞼黏連等癥狀，病程持續時間較長，可達2-3個月。該病 主要在秋冬季節和早春極易發生，多發于成年雞，病因極其復雜。病雞主要 通過呼吸道分泌物排出病毒，經空氣傳播；被病毒污染的蛋、飼料、飲水、 用具等也會傳染。本病除經水平傳播外，還可經卵垂直傳播，雞場一旦發生 本病，很容易造成連年發生。

目前尚無治療本病的的特效藥，通常采用消除病因、提高機體抗病能力 等對癥綜合療法，以緩解癥狀，減少并發癥的發生治療方法。此法雖對控制 本病有一定的效果，但對發病較重的雞則效果甚微。發病雞群主要以投服抗 菌藥物為主，該項措施對防止繼發感染有一定作用，但是該方法不能起到預 防作用。對于雞傳染性喉氣管炎病的易感雞群，每年定期對雞接種雞傳染性 喉氣管炎疫苗是預防雞傳染性喉氣管炎的有效方法。其次應增強營養或藥物 干預，提高自身免疲力。通過藥物提高機體抵抗力或調節免疫力也是一種預 防雞傳染性喉氣管炎的有效方法，轉移因子可起到此作用。

轉移因子(Transferfactor,TF)是T淋巴細胞釋放的一種能夠轉移致敏信息 的可透析小分子物質-多肽核苷酸復合物，它能夠特異地將供體的細胞免疫信 息轉移給受體正常的淋巴細胞，從而增強受體的免疫功能，被譽為T細胞活 性的觸發劑、細胞免疫的增強劑、細胞免疫調節劑及干擾素產生啟動劑。具 有傳遞免疫信息、激發免疫細胞活性、調節免疫功能、增強機體特異性和非 特異性細胞免疫功能等作用，可以抵抗真菌、病毒等非細菌性感染。TF含多 種成分，分子量小，無熱原，無抗原性，無毒副作用和無種屬差異，是一種 新型而又安全的免疫制劑。

目前轉移因子的生產主要是通過半透膜透析得到，一次性生產量少，操 作費用高，因此需要一種高效、快速、經濟的方法來獲取轉移因子，進而實 現轉移因子的大規模工業化生產。除此之外，豬脾臟、胸腺以及淋巴結組織 作為免疫活性細胞聚集的場所，且是活豬宰殺后的下腳料，成本較低而且材 料來源非常廣泛，因此從這類細胞中提取特異性轉移因子，有重要的理論意 義和現實意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術中存在的不足，提供一種抗 雞傳染性喉氣管炎病毒轉移因子的制備方法。

本發明抗雞傳染性喉氣管炎病毒轉移因子的制備方法，按照以下步驟進 行:

(1)制備病毒抗原：將雞傳染性喉氣管炎病毒接種于9-11日齡的雞胚尿 囊液中，33℃-37℃溫箱孵育，24h內死亡的雞胚棄去，120h后收集有明顯痘 斑的雞胚絨毛尿囊膜，以磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后，置于組織勻漿機內制 成懸液，-20℃—-40℃冰箱內保存備用；

(2)提取病毒抗原：將步驟(1)中得到的懸液反復凍融3-5次后，裝入 厚壁小瓶子內，超聲15-20min，4℃、5000rpm離心20-30min，棄去沉淀，收 集上清液，將上清液經4℃、7000rpm離心20-30min，棄去沉淀，收集上清液， 經4℃、25000rpm離心20-30min，棄去上清液，取沉淀，用等體積PBS溶液 溶解。將上述溶液裝入以15％、30％、45％、60％及80％的蔗糖制備的不連續 梯度密度離心管，超速離心，4℃、15000-20000rpm離心2-4h，根據雞傳染性 喉氣管炎病毒的分子量確定雞傳染性喉氣管炎病毒所在位置，吸出并置于 -20℃—-40℃冰箱內保存備用；