[發明專利]一種蜜環菌濃縮液的質量控制方法

在審

• 申請號: 201410502761.7
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104316699A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 周美娟;胡浩武;杜育華;袁桂平;梅玲華;耿炤;姜偉
• 申請（專利權）人: 江西匯仁藥業有限公司;上海中創醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

技術領域：

本發明屬于醫藥領域，具體涉及蜜環菌濃縮液的質量控制方法。?

背景技術：

蜜環菌濃縮液為白蘑科真菌蜜環菌Armillaria?mellea(Vahl.ex?Fr)Quel.人工液體發酵的培養液，經濃縮濾過的液體。近年來經大量的研究實驗證明，蜜環菌的菌絲體和發酵液都具有與天麻相似的藥理作用和臨床療效(郭順星,等.蜜環菌的化學成分及應用研究[J].微生物學通報，1996.23(4):239.)。藥理研究表明，蜜環菌濃縮液主要具有鎮靜催眠、抗驚厥、保護心腦血管、改善眩暈綜合癥、增強免疫等作用。蜜環菌濃縮液為中成藥腦心舒口服液中主要原料，其為白蘑科真菌蜜環菌Armillaria?mellea(Vahl.ex?Fr)Quel.人工液體發酵的培養液，經濃縮濾過的液體，在市場上可以買到，在《中藥大辭典》榛磨項下有具體描述，比如如下的生產方法：?

1、菌種培養?

1.1、母種(試管種)培養?

取蜜環菌Armillaria?mellea(Vahl.ex?Fr.)Quel.保藏菌株，用PDA培養基(馬鈴薯200g煮熟過濾，蔗糖20g，硫酸鎂0.75g，磷酸二氫鉀0.75g，瓊脂20g，配置1000ml)培養。滅菌條件：110℃,0.1MP，滅菌30分鐘。培養溫度26-28℃，培養周期7-10天。?

1.2、搖床擴大培養(液體菌種培養)?

取培養好的母種(試管種)，轉接于三角瓶液體搖床培養，培養基為PDA培養基不加瓊脂，500ml三角瓶裝量250-300ml。接種(母種)后于搖床上110n/m振蕩培養。滅菌條件：110℃,0.1MP，滅菌30分鐘。培養溫度26-28℃，培養周期3-4天。?

1.3、種子罐培養?

培養好的三角瓶液體菌種轉接于種子罐進行發酵培養，培養基同液體菌種培養基。滅菌條件：110℃,0.1MP，2小時。培養溫度26-28℃，培養周期4-6天。?

1.4、發酵?

培養基：麥麩200g，玉米粉10g，蔗糖20g，酵母粉10g，水1000g。將60％體積的培養基置發酵罐中，滅菌，將種子罐菌種轉接于發酵罐內進行發酵培養，待發酵液變為紫褐色，由稠變稀，部分菌絲開始自溶，菌絲顆粒變碎，pH值降至5.2—5.6，罐內亮度開始減弱，即可出罐。滅菌條件：121℃,0.1MP，2小時。培養溫度26-28℃，培養周期6-7天。?

2、濾過?

培養好的發酵液，板框壓濾。?

3、濃縮?

將上述濾液置真空減壓濃縮罐內，減壓濃縮至相對密度1.18(20℃)。?

但蜜環菌濃縮液作為藥物使用目前尚無法定標準。?

蜜環菌濃縮液屬于成分復雜的復合成分原料，其檢測方法的準確性，精密性，方便性是非常重要的，為此，本發明人進行了大量的研究，最終發現一種有效的蜜環菌濃縮液的檢測方法。?

發明內容：

本發明的目的在于提供蜜環菌濃縮液的質量控制方法，以解決目前沒有標準的狀況。?

為此，本發明提供一種有效的蜜環菌濃縮液的檢測方法，所述方法包括以下步驟：?

蜜環菌濃縮液性狀的觀察，蜜環菌濃縮液的鑒別，蜜環菌濃縮液的檢查，對蜜環菌濃縮液含有的成分進行含量測定，因此，本發明的方法主要的步驟是：?

蜜環菌濃縮液性狀的觀察，步驟是：?

本品為棕黃至棕褐色澄清液體，味微酸、苦、微甜。?

蜜環菌濃縮液的鑒別，步驟是：?

鑒別1：取本品數滴于濾紙上，噴以茚三酮試液，烘干后顯藍紫色或紫紅色斑點。?

鑒別2：取本品約1.0ml，加水10ml，搖勻，取2ml，加5％α-萘酚乙醇液數滴，搖勻，沿壁加入濃硫酸1ml，在兩液面交界處顯紫紅色環。?

鑒別3：取本品約15ml，置分液漏斗中，加乙醚分兩次萃取，合并萃取液，揮干。殘渣加乙醇1ml使溶解，做為供試品溶液。取5-羥甲基糖醛對照品適量，制成1mg/ml的對照品溶液，以上兩溶液各10ul?分別點于同一硅膠GF254板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯-氯仿(2：2：1)為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。?

蜜環菌濃縮液的檢查，步驟是：?

縮液的檢查，步驟是：?

相對密度：具體操作均符合《中國藥典》通則項下相關要求，本品的相對密度應為1.030～1.035(20℃)，?