[發明專利]一種3’-5’外切酶活性測定方法有效
| 申請號： | 201410502154.0 | 申請日： | 2014-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN104293930A | 公開（公告）日： | 2015-01-21 |
| 發明（設計）人： | 徐曉昱;王靜 | 申請（專利權）人： | 南京諾唯贊生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/44 |
| 代理公司： | 南京正聯知識產權代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 210014 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 外切 活性 測定 方法 | ||
1.?一種3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根據單鏈模板合成有3’錯配的引物，將引物與單鏈模板混合并退火，接著加入3’-5’外切酶活性進行3’堿基外切反應，然后加入足量沒有3’-5’外切酶活性的聚合酶延長引物直至獲得雙鏈DNA，隨后檢測反應體系中雙鏈DNA的相對量，并根據檢測結果推導出3’-5’外切酶活性程度。
2.?如權利要求1所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，反應體系中雙鏈DNA的相對量的測量是利用僅與雙鏈DNA或僅與單鏈DNA結合的熒光染料，通過熒光法檢測得到的，并且雙鏈DNA的相對量是以熒光強度表示的。
3.?如權利要求2所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所采用的熒光染料是雙鏈DNA特異性熒光染料。
4.?如權利要求3所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所述熒光染料是picogreen染料。
5.?如權利要求1所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所采用的單鏈模板是環狀單鏈DNA模板。
6.?如權利要求5所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所用模板是M13噬菌體單鏈DNA。
7.?如權利要求1所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，錯配的數目是1個。
8.?如權利要求6所述的3’-5’外切酶活性測定方法，其特征在于，所用引物序列是5’-aagccatccgcaaaaatgacctcta-3’。
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