[發明專利]一種異氯硫磷膠體金快速檢測試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201410499528.8
• 申請日: 2014-09-25
• 公開（公告）號: CN104267179A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 韓志成
• 申請（專利權）人: 句容市農業技術推廣中心
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559;G01N33/577
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

技術領域

本發明屬于農藥殘留免疫分析技術領域，具體涉及一種異氯硫磷膠體金快速檢測試紙條及其制備方法。

背景技術

異氯硫磷白色結晶固體，不溶于水，溶于丙酮、環己烷、甲苯、二甲苯、乙酸乙酯，用作農用殺蟲劑，該物質對環境有危害，應特別注意對水體的污染。建議用控制焚燒法或安全掩埋法處置。雄性大鼠的經口LD50為400和460mg/kg，雌性大鼠經口值為330mg/kg，雄雌兩性經皮分別為790和l，250mg/kL大鼠體內總代謝與二乙基化合物的水解相反，有相當大部分為烷基磷酸酯及其他二烷基化合物的水解作用。

目前，對農藥殘留的檢測方法主要是儀器分析方法和酶聯免疫分析方法(ELISA)等。儀器分析方法包括高效液相色譜法(High?performance?liquid?chromatography，HPLC)、氣相色譜法(Gas?chromatography，GC)、薄層色譜法(Thin?layer?chromatography，TLC)、液-質串聯法(HPLC-MS)和氣-質串聯法(GC-MS)等，這些儀器分析方法雖然可以達到較高的檢測靈敏度，但需要復雜昂貴的儀器設備及專業操作人員，加之樣品前處理繁瑣費時、檢測費用高，難以滿足快速、在線檢測的需要。ELISA(Enzyme?Linked?Immunosorbent?Assay)方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結果不夠直觀，不能在線進行檢測等缺陷。因而ELISA方法的應用受到很大的限制。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的第一個技術問題是提供了克服上述異氯硫磷快速檢測技術的不足，研制出一種特異、敏感、快速、簡便的異氯硫磷膠體金快速檢測試紙條。本發明所要解決的第一個技術問題是提供了上述試紙條的制備方法。

技術方案：本發明提供的技術方案是一種異氯硫磷膠體金快速檢測試紙條，所述試紙條含有襯板和依次排列在襯板上的樣品墊、金標結合墊、纖維素膜和吸水墊，所述襯板為不吸水的韌性材料，所述的韌性材料用硬質塑膠條或不吸水硬紙條制成，所述金標結合墊內吸附有異氯硫磷金標抗體，所述纖維素膜上有隱形檢測線和隱形對照線，所述隱形檢測線用異氯硫磷半抗原偶聯的載體蛋白溶液印制，所述隱形對照線用兔抗鼠IgG抗體印制。所述吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙或濾油紙。

其中，上述異氯硫磷金標抗體為膠體金標記的異氯硫磷單克隆抗體。

其中，上述偶聯異氯硫磷半抗原的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一種或幾種。

在試紙條的吸水墊上設有手柄端保護膜，在樣品墊上設有樣品浸入端保護膜。所述的保護膜為不透明的膠膜，樣品墊、金標結合墊對應的保護膜上印制有待測樣品標記線，該標記線偏向樣品墊一側約0.5厘米處。

其中，上述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜中的一種或幾種制成。

其中，上述纖維素膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜中的一種或幾種。

上述異氯硫磷膠體金快速檢測試紙條的制備方法包括以下步驟：

1)異氯硫磷半抗原的合成；

2)異氯硫磷半抗原與載體蛋白偶聯得到異氯硫磷半抗原偶聯的載體蛋白溶液；

3)異氯硫磷金標抗體的制備；

4)金標結合物墊的制備；

5)兔抗鼠IgG抗體的制備；

6)異氯硫磷半抗原偶聯的載體蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗體包被纖維素膜；

7)試紙條的組裝。

所述步驟1)中異氯硫磷半抗原的合成步驟如下：

81)O-甲基-O-(2-氯-4-硝基苯基)硫代磷酰氯的合成：稱取2-氯-4-硝基苯酚3.7g用乙腈溶解；常溫下，將溶液逐滴加入20mL乙腈溶解的O-甲基硫代磷酰氯3.83g、粉狀K₂CO₃8.7g混合溶液，滴完后，繼續反應1小時，反應完畢后真空過濾，蒸去溶劑，得黃色油狀物，柱層析，用體積比8：1的石油醚/二氯甲烷洗滌，蒸去溶劑得淡黃色油狀液體5.9g；