[發明專利]流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用

有效

• 申請號: 201410493364.8
• 申請日: 2014-09-24
• 公開（公告）號: CN104198357A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 孫俊穎;劉志成;郭鵬舉
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;裘暉

1.流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于：是將流式細胞術方法應用于疫苗生產過程中，檢測疫苗生產過程中的活菌數；

所述的疫苗包括大腸桿菌疫苗、葡萄球菌疫苗、豬丹毒疫苗、鏈球菌疫苗、沙門氏菌疫苗、魏氏梭菌疫苗、雞毒支原體疫苗、多殺性巴氏桿菌疫苗和副豬嗜血桿菌疫苗。

2.根據權利要求1所述流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于包含如下步驟：

(1)選擇如下所述的熒光染料中的至少兩種著染目標菌；熒光染料為對活菌細胞能進行染色的染料、對總菌數能進行染色的染料和對死菌細胞能進行染色的染料；

(2)然后用流式細胞儀檢測細菌熒光信號的變化，通過測定細菌熒光信息的變化，得到FCM圖譜；FCM圖譜具有如下參數中的至少兩種：活菌數、死菌數和總菌數；依據FCM圖譜得到活菌數的比例；

(3)通過絕對計數法得到目標菌菌液的濃度；

(4)依據步驟(2)得到的活菌數的比例和步驟(3)得到的目標菌菌液的濃度，得到目標菌的活菌量和死菌量。

3.根據權利要求2所述流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于：步驟(1)為：選擇如下所述的熒光染料著染目標菌；熒光染料為對活菌細胞能進行染色的染料和對總菌數能進行染色的染料中的一種與對死菌細胞能進行染色的染料形成的組合。

4.根據權利要求2或3所述流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于：

步驟(1)中所述的對活菌細胞能進行染色的染料為CFDA-SE；；

步驟(1)中所述的對總菌數能進行染色的染料為SYBR?Green?I；

步驟(1)中所述的對死菌細胞能進行染色的染料為PI。

5.根據權利要求2所述流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于：步驟(3)中所述通過絕對計數法得到目標菌菌液的濃度通過血球計數板計數或通過流式細胞儀計數。

6.根據權利要求5所述流式細胞術方法在疫苗生產實時監測中的應用，其特征在于：所述的通過流式細胞儀計數為通過如下步驟實現：將已知濃度的磁珠和所述的目標菌菌液混合，通過流式細胞儀檢測，通過如下公式計算得到目標菌菌液的濃度；

公式為：

(菌細胞數/磁珠數)*(每管內總磁珠數/樣品總體積)*稀釋倍數＝菌液濃度；

菌細胞數指一定時間內流式細胞儀檢測到的菌細胞數；磁珠數指一定時間內流式細胞儀檢測到的磁珠數；每管內總磁珠數指樣品檢測管內的磁珠總數；稀釋倍數指菌液的稀釋倍數。