[發(fā)明專利]一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410492307.8 | 申請(qǐng)日： | 2014-09-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104232621A | 公開（公告）日： | 2014-12-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邱英華;周細(xì)武;唐濤 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 寧波有成生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 315040 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 痰液中 提取 核酸 試劑盒 方法 | ||
1.一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：在痰液中加入消化液KB，震蕩混合均勻，加入蛋白酶保溫后，再加入結(jié)合液BS，震蕩混合均勻后將溶液全部通過核酸吸附柱，樣品中的核酸將結(jié)合到吸附柱的硅膠膜上，用洗滌液SWB1和SWB2分別洗滌吸附柱后，再用洗脫液將核酸從吸附柱上洗脫下來。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：消化液KB同時(shí)具有液化痰液和保存核酸的功能，與痰液混合均勻后，可放置于4℃1～30天，有效保護(hù)樣本中的核酸不被降解。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：消化液KB的用量為痰液樣本的1～10倍量。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：在消化液KB中，SDS的濃度為0.25g/L～0.95g/L，最適濃度為0.55g/L～0.75g/L；EDTA的濃度為0.05mmol/L～1.5mmol/L，最適濃度為0.06mmol/L～0.09mmol/L；吐溫20的濃度為0.1％～6％，最適濃度為2.5％～3％；DTT的濃度為20mmol/L～100mmol/L，最適濃度為60mmol/L～85mmol/L；Tris-HCl濃度為20mmol/L～100mmol/L，最適濃度為50mmol/L～85mmol/L，最適pH為8.0～8.8。
5.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：使用蛋白酶消化痰液中的蛋白，加入蛋白酶后，于37～65℃保溫1～5小時(shí)進(jìn)行酶解。
6.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：在結(jié)合液BS中，鹽酸胍的濃度為2mol/L～8mol/L，最適濃度為6mol/L～7mol/L；氯化鈉的濃度為50mmol/L～1mol/L，最適濃度為150mmol/L～350mmol/L；Tris-HCl濃度為50mmol/L～500mmol/L，最適濃度為100mmol/L～180mmol/L，最適pH為5.8～6.4。
7.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：洗滌液SWB1中，鹽酸胍的濃度為3mol/L～7mol/L，最適濃度為4mol/L～5mol/L；Tris-HCl濃度為50mmol/L～500mmol/L，最適濃度為200mmol/L～280mmol/L，最適pH為5.8～6.4；乙醇濃度為50％～80％，最適濃度為65％～75％。
8.如權(quán)利要求1所述的一種從痰液中提取核酸的試劑盒及提取方法，其特征在于：洗脫液SWB2可以為純水或pH值大于7.0的低鹽溶液。
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