[發(fā)明專利]一種檢測(cè)人血清中總睪酮的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410484568.5
• 申請(qǐng)日: 2014-09-19
• 公開（公告）號(hào): CN104215716A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何翠紅;趙蓓蓓;程雅婷;李卓陽(yáng);佘旭輝;董衡;李維;劉偉霞;梁曉翠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽(yáng)金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤;萬(wàn)志香

1.一種檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)前處理

向人血清樣品的試管中加入含睪酮內(nèi)標(biāo)物的內(nèi)標(biāo)液，混勻后加入甲基叔丁基醚進(jìn)行蛋白沉淀并萃取睪酮，然后離心后置于-65～-75℃條件下放置1-2h，接著轉(zhuǎn)移上清液并進(jìn)行干燥，然后加入復(fù)溶劑，得到待測(cè)樣品；

其中，所述睪酮內(nèi)標(biāo)物為睪酮的碳代標(biāo)記物或氘代標(biāo)記物；所述內(nèi)標(biāo)液與人血清樣品的體積比為1:10～1:4；所述人血清樣品、甲基叔丁基醚及復(fù)溶劑的體積比為2:8:1～2:15:1；

(2)檢測(cè)

對(duì)所述待測(cè)樣品采用高通量液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)；

其中色譜條件為：色譜柱為C18色譜柱；柱溫為48-52℃；流動(dòng)相為甲醇和水，流速為0.5-1ml/min，采用梯度洗脫：起始流動(dòng)相甲醇:水的體積比為35:65，待測(cè)物出峰時(shí)流動(dòng)相甲醇:水的體積比為60:40，而后再回到起始流動(dòng)相甲醇:水的體積比為35:65，并保持1～2min，整個(gè)梯度的時(shí)間為3～8min；

質(zhì)譜條件為：采用正離子模式，掃描方式采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描MRM；

目標(biāo)定量離子的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描MRM的條件為：睪酮母離子的質(zhì)/荷比為289.2～290.2，對(duì)應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比為97.1～98.1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，內(nèi)標(biāo)的定量離子對(duì)的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描MRM的條件為：內(nèi)標(biāo)母離子的質(zhì)/荷比為290.2～296.2，對(duì)應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比為110.1～116.1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜條件還包括：睪酮定量離子對(duì)的去簇電壓為110v，入口電壓為10v，碰撞電壓為32v，出口電壓為20v；睪酮內(nèi)標(biāo)的定量離子對(duì)的去簇電壓為100v，入口電壓為10v，碰撞電壓為34v，出口電壓為12v。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜條件的離子源參數(shù)包括：電離源為電噴霧電離ESI源；氣簾氣壓力為15psi；加熱氣壓力為50psi；輔助加熱氣壓力為50psi；加熱氣溫度為400℃；碰撞氣為高純氮?dú)猓瑝毫?psi；電噴霧針電壓為4000V。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，所述高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀包括兩套高通量液相色譜系統(tǒng)，所述兩套高通量液相色譜系統(tǒng)的液相色譜條件一樣；第一套液相采集窗口為2.0min-3.0min；第二套液相采集窗口為2.0min-3.0min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，步驟(1)中所述離心的條件包括：以8000-10000r/min的速度離心4.5-5.5min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，步驟(1)中所述干燥的條件為通50℃的氮?dú)庵敝粮稍铩?/p>

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，步驟(1)中所述復(fù)溶劑為體積比為50:50-10:90的甲醇和水的混合物。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，步驟(1)中所述內(nèi)標(biāo)液為含睪酮內(nèi)標(biāo)物的乙腈-水溶液，其中乙腈與水的體積比為50:50-10:90。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的檢測(cè)人血清中總睪酮的方法，其特征在于，該檢測(cè)方法還包括如下步驟：定性判斷和定量計(jì)算，

依據(jù)睪酮、睪酮內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)保留時(shí)間和檢測(cè)的定量離子對(duì)的豐度比判斷睪酮的存在；

依據(jù)睪酮與對(duì)應(yīng)睪酮內(nèi)標(biāo)物在內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線上的峰面積比值，計(jì)算人血清樣品中的睪酮的含量。