[發(fā)明專利]一種用于檢測五常大米主要品種的引物對、檢測試劑盒及其檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410482094.0 | 申請日： | 2014-09-19 |
| 公開（公告）號： | CN104250666B | 公開（公告）日： | 2017-01-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳國培;鄭彥婕;黎永樂;賴心田;林霖;楊國武 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳市計量質(zhì)量檢測研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市科吉華烽知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙)44248 | 代理人： | 胡吉科,孫偉 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市龍*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 檢測 五常 大米 主要 品種 引物 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種用于檢測五常大米主要品種的引物對，包括：?
特征DNA片段S48-468引物對，所述引物對的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示；
特征DNA片段S75-632/692引物對，所述引物對的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示；
特征DNA片段S43-1000引物對，所述引物對的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：6所示；
特征DNA片段SBE1引物對，所述引物對的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8所示；
特征DNA片段S73-2438引物對，所述引物對的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：9和SEQ?ID?NO：10所示。
2.包括權(quán)利要求1所述引物對的五常大米主要品種檢測試劑盒。
3.一種檢測五常大米主要品種的方法，包括步驟：
（1）配制PCR反應(yīng)體系，進行多重PCR擴增；
（2）PCR擴增條件為：95℃?3min；95℃?30s，55℃?30s，72℃?2min，35個循環(huán)，72℃?10min；
（3）凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物。
4.如權(quán)利要求3所述的檢測五常大米主要品種的方法，其特征是：所述PCR反應(yīng)體系為：
所述PCR反應(yīng)體系為：
10×PCR?buffer??????????????????2μL
dNTP?mixture?各2.5mM????????1.6μL
MgCl2???25mM??????????????????1.2μL
Taq酶??5U/μL???????????????0.1μL
引物1???10uM????????????????各0.1μL
引物2???10uM????????????????各0.2μL
DNA模板?50ng/μL????????????2μL
滅菌超純水??????????????????11.9μL
總體積??????????????????????20μL；
所述引物1指SEQ?ID?NO：1～8；引物2指SEQ?ID?NO：9～10；10×PCR?buffer含100mM?Tris-HCl?pH8.3、500mM?KCl。
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