[發(fā)明專利]一種汀肝素鈉制備工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410480869.0
• 申請日: 2014-09-19
• 公開（公告）號: CN104262508A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭林;李榮;李福川;崔慧斐;陳少鵬;于合新
• 申請（專利權(quán)）人: 東營天東制藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 東營雙橋?qū)＠碛邢挢?zé)任公司 37107
• 代理人: 羅文遠(yuǎn)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種汀肝素鈉制備工藝。

背景技術(shù)

????汀肝素鈉（Tinzaparin?Sodium）低分子鈉鹽由丹麥利奧公司開發(fā),并于1996年6月上市,商品名Innohep。汀肝素鈉1991年在歐洲上市，2000年7月經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市。汀肝素鈉2013年的全球銷售額約6.2億美元，在低分子肝素類產(chǎn)品中銷售額單品種全球前四。與此同時，國內(nèi)尚無該藥品上市，存在極大的市場潛力。

肝素系自豬或牛的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬黏多糖類物質(zhì)。具有六糖或八糖重復(fù)單位的線性鏈條結(jié)構(gòu)，其分子量在3000~37000之間，平均分子量15000左右，肝素具有抗凝、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌、調(diào)節(jié)血脂等多種藥理活性，但長期使用則可能產(chǎn)生某些不良反應(yīng)，如出血和誘導(dǎo)血小板減少等。低分子肝素(1owmolecular?weight?heparin，LMWH)?是肝素分級或降解而得到的分子質(zhì)量較小的片段。近10?年來。人們對低分子肝素的研究發(fā)現(xiàn)，其抗血栓作用優(yōu)于肝素，具有生物利用度高、體內(nèi)半衰期長、出血傾向小，口服易吸收等特點。由于低分子肝素有效性和安全性均優(yōu)于普通肝素，目前已成為肝素類藥物研究的熱點。

目前市場上低分子肝素LMWH的制備方法主要是化學(xué)裂解法和酶解法，化學(xué)裂解法主要是由β-消除法、亞硝酸降解法，過氧化氫降解法、酸降解法和射線降解法等，這些方法操作過程中反應(yīng)比較劇烈，容易使得肝素末端的基團(tuán)產(chǎn)生破壞，造成LMWH的生物活性單位或多或少的改變，從而有可能導(dǎo)致整個產(chǎn)品的不穩(wěn)定。而酶解法就是在比較溫和的條件下將肝素降解成所需的低分子肝素產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種汀肝素鈉制備工藝，利用肝素酶Ⅰ切斷肝素和硫酸乙酰肝素（相對活性約3:1）在葡萄糖胺和○-硫酸艾杜糖醛酸之間的連鍵，將肝素降解成雙糖小分子，從而得到汀肝素這一產(chǎn)品。

其技術(shù)方案是包括以下制備步驟：

（1）、制備肝素鈉溶液：

將精品肝素鈉溶解為5%~10%濃度的溶液，調(diào)節(jié)料液pH值7.0~8.0、溫度25-30℃；

（2）、制備肝素鈉酶解液：

加入上述步驟的精品肝素鈉溶液體積的1.0%-3.0%的肝素酶，為液體，酶解時間為1.0~2.0h，間歇攪拌；

反應(yīng)完成后在線檢測其料液232nm的比吸收光度為?0.9~1.2，迅速將料液升溫至80.0~95.0℃，0.2~0.5h?終止整個降解反應(yīng)；

（3）、制備酶解液沉淀物：

將酶解完成的液體制冷，加入酶解液2~3倍藥用乙醇，充分?jǐn)嚢璧闷涑恋砦铮?/p>

（4）、制備精品汀肝素鈉：

將上述沉淀物溶成10%~15%濃度，用0.22微米的除菌過濾膜進(jìn)行進(jìn)一步處理，最終產(chǎn)品進(jìn)行冷凍干燥得到汀肝素鈉。

優(yōu)選的，本發(fā)明的步驟3中，通過液相檢測主要分子量分布在5500—7500，分子量小于2000的組分不大于10%，2000~8000的組分在60%和72%之間，大于8000的組分在22%和36%之間。

本發(fā)明與現(xiàn)有工藝相比，本發(fā)明工藝的優(yōu)點和有益效果在于：

1)?利用肝素鈉為原料，通過控制降解和紫外吸收在線監(jiān)控，使降解反應(yīng)更加可控，有利于減少副產(chǎn)物的生成，實現(xiàn)汀肝素鈉的規(guī)模化生產(chǎn)；

2）采用本發(fā)明工藝，所得產(chǎn)品的重均分子量為5500—7500，分子量小于2000的組分不大于10%，2000~8000的組分在60%和72%之間，大于8000的組分在22%和36%之間，抗抗Ⅹ活性≧110IU/mg，抗Ⅹa／抗Ⅱa?為1.5-2.5，本產(chǎn)品抗血栓活性較好，純度高，雜質(zhì)少，產(chǎn)品穩(wěn)定。

具體實施方式

????實施例1：向1kg精品肝素鈉（效價175usp/mg）加入900ml純化水，待完全溶解后，將料液溫度調(diào)至27℃，然后用濃度為6mol/L的氫氧化鈉將料液pH值調(diào)節(jié)至7.3，精確量取肝素鈉溶液體積為1000ml，加入肝素鈉溶液體積1%的肝素酶，即10ml，酶解2.0h。反應(yīng)過程中，間歇攪拌，酶解完畢，在線檢測其料液232nm的光吸收為?0.9，迅速將料液升溫至87℃，反應(yīng)0.3h，?終止整個降解反應(yīng)。將酶解完成的液體制冷，加入酶解液2~3倍藥用乙醇，充分?jǐn)嚢璧闷涑恋砦铮?/p>

液相檢測其分子量為：主要分子量為6150，分子量小于2000的組分為9.0%，2000~8000的組分為67%，大于8000的組分為32%；