[發(fā)明專利]一種滅螺細(xì)菌及其制備生物滅螺劑的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410477758.4 | 申請(qǐng)日： | 2014-09-17 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104531547B | 公開（公告）日： | 2019-06-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張倩;孫啟祥;袁藝;丁洲 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12N1/20 | 分類號(hào)： | C12N1/20;A01N63/00;A01P9/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 101101*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 細(xì)菌 及其 制備 生物 滅螺劑 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種滅螺細(xì)菌及其制備生物滅螺劑的方法，所述滅螺細(xì)菌Enterobacter cloacae，B2，其生物保藏號(hào)為CCTCC M 2014103，該滅螺細(xì)菌CCTCC M 2014103為陰溝腸桿菌，是從柏樹枝葉中篩選獲得的，能夠快速有效地殺滅釘螺。與現(xiàn)有微生物相比較，本發(fā)明提供了一種可以殺滅釘螺的細(xì)菌，可以直接作為生物滅螺劑使用，用該滅螺細(xì)菌CCTCC M 2014103制備的生物滅螺劑與傳統(tǒng)化學(xué)滅螺劑相比，制備方法簡單，成本低，對(duì)環(huán)境友好。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種微生物，尤其涉及一種滅螺細(xì)菌及其制備生物滅螺劑的方法。
背景技術(shù)
釘螺作為血吸蟲唯一的中間宿主，其繁衍和分布與血吸蟲病的流行傳播密切相關(guān)，所以抑螺滅螺被認(rèn)為是阻止血吸蟲病傳播的重要途徑。目前主要的滅螺劑是化學(xué)藥物類，這類藥物容易對(duì)環(huán)境造成不可逆破壞。近年來植物內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu)得到廣泛的關(guān)注和研究，國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)植物體內(nèi)存在大量的微生物，這些微生物在動(dòng)物的生長、發(fā)育、健康等方面都起到重要作用，因此，本發(fā)明將研究的方向?qū)?zhǔn)了植物內(nèi)的微生物群落，希望能找到一種選擇性強(qiáng)、對(duì)環(huán)境影響較小的生物滅螺劑，以替代傳統(tǒng)化學(xué)滅螺劑，保護(hù)環(huán)境。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種解決上述問題，選擇性強(qiáng)、對(duì)環(huán)境影響較小的滅螺細(xì)菌及其制備生物滅螺劑的方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種滅螺細(xì)菌，分類命名為Enterobacter cloacae B2，所述滅螺細(xì)菌的生物保藏號(hào)為CCTCC M 2014103，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢大學(xué)，保藏日期為2014年3月26日；
一種構(gòu)建CCTCC M 2014103的方法，所述方法包括以下步驟：
a.培養(yǎng)基的制備：
1)YEB液體培養(yǎng)基：牛肉浸膏為5.0g/L，酵母膏為1.0g/L，蛋白胨為5.0g/L，MgSO4·7H2O為4g/L，蔗糖為5.0g/L，pH7.0～7.5；
2)YEB固體培養(yǎng)基：將上述YEB液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂；
b.進(jìn)行篩選：
1)在無菌條件下，取新鮮柏樹枝葉，用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精浸泡1分鐘，0.1％升汞浸泡12分鐘，無菌生理鹽水沖洗3遍后，將柏樹枝葉研磨，獲得組織碎末；
2)將上一步驟的組織碎末接種到100mL的YEB液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12～16小時(shí)，培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為180rpm，獲得培養(yǎng)液；
3)按體積計(jì)，將上一步驟的培養(yǎng)液用無菌生理鹽水依次稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-7，獲得稀釋液；
4)將上一步驟的稀釋液涂于YEB固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12～16小時(shí)，挑取單菌落進(jìn)行純化，即獲得所述滅螺細(xì)菌CCTCC M 2014103；
c.獲取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并檢測(cè)；
作為優(yōu)選，步驟c中，將上述純化后的滅螺細(xì)菌CCTCC M 2014103接種到Y(jié)EB固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12～16小時(shí)，挑取單菌落進(jìn)行菌落PCR，所述菌落PCR的引物為細(xì)菌16SrRNA通用引物27F和R518，所述引物的序列為：
SEQ NO.2：27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
SEQ NO.3：R518：ATTACCGCGGCTGCTGG；
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