[發明專利]一種真菌發酵液及其應用

有效

• 申請號: 201410477645.4
• 申請日: 2014-09-18
• 公開（公告）號: CN104313103B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 牛雪梅;張克勤;李東嫻;王彥利
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12R1/80
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明涉及一種真菌YMF?1.00864發酵液及其應用，屬于應用微生物學技術領域。

背景技術：

膽酸(3α,7α,12α-三羥基-5-β-膽烷-24-酸，CA)和鵝去氧膽酸(3α,7α-二羥基-5-β-膽烷-24-酸，CDCA)是一種具有類固醇結構的有機酸，能乳化脂肪，促進其消化作用。膽酸主要用于生化研究，醫藥中間體，能做為乳化劑、增稠劑和穩定劑，非變性離子去垢劑,和食品添加劑。膽酸鈉是利膽藥，治療膽囊炎、膽汁缺乏、腸道消化不良等癥。鵝去氧膽酸(CDCA)主要作用是降低膽汁內膽固醇的飽和度，絕大多數患者服用CDCA后(當CDCA占膽汁中膽鹽的70％時)，脂類恢復微膠粒狀態，膽固醇就處于不飽和狀態，從而使結石中的膽固醇溶解、脫落。大劑量的CDCA(每日10～15mg/kg)能夠抑制膽固醇的合成，并增加膽石癥患者膽汁的分泌，但其中的膽鹽和磷脂分泌量維持不變。本品是目前世界上用量最大的治療膽結石藥物之一，又是合成熊去氧膽酸(UDCA)和其他甾體化合物的原料。目前膽酸(CA)和鵝去氧膽酸(CDCA)的制備主要是從家畜(豬、牛、羊、兔)的膽汁中提取。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種真菌YMF?1.00864發酵液及其應用。

本發明是這樣實現的：

本發明使用的真菌菌株是青霉(Penicillium?sp.)YMF?1.00864,菌株YMF1.00864已于2013年4月1日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；保藏號：CGMCC?No.7407。

本發明的真菌YMF?1.00864發酵液，經如下步驟得到：

(1)真菌的培養

將先在YGP固體培養基中常規活化3天的保藏號為CGMCC?No.7407的青霉(Penicillium?sp.)YMF?1.00864菌種保存在PDA固體培養基斜面上，使用時，在無菌條件下切取±2cm?x±2cm的菌塊，分別接種于滅菌的YGP、CML、YGS、BEP、YBS液體培養基250mL中，在28℃發酵3天，然后用液體接種法接種YGP液體培養基中，每瓶接種量為25mL，培養條件為500mL三角瓶裝量250mL，每株菌發酵5L,28℃，180rpm培養12天；其中：

PDA固體培養基為：去皮馬鈴薯200g，切成小塊后煮沸30min，4層紗布過濾，在濾液中加入20g葡萄糖，加水定容至1L，加入1.5％(m/v)的瓊脂，121℃滅菌20分鐘后待用；

YGP固體培養基為：酵母膏5g，葡糖糖10g，蛋白胨1g，放入水中加熱至完全溶解，加水定容至1L，加入1.5％(m/v)的瓊脂則為固體培養基，121℃滅菌20分鐘后待用；

CML液體培養基為：稱取20g玉米粉，加適量水煮沸30min，4層紗布過濾，定容至1L，121℃滅菌20min；

YGS液體培養基為：稱取5g酵母膏、1g大豆蛋白，10g葡萄糖，放入水中加熱至完全溶解，加水定容至1L，121℃滅菌20min；

BEP液體培養基為：稱取2g牛肉膏、1g蛋白胨、10g葡萄糖，放入水中加熱至完全溶解，加水定容至1L，121℃滅菌20min；

YBS液體培養基為：稱取2g酵母膏、1g大豆蛋白胨、1g牛肉膏，10g葡萄糖，放入水中加熱至完全溶解，加水定容至1L，121℃滅菌20min；

YGP液體培養基為：酵母膏5g，葡糖糖10g，蛋白胨1g，放入水中加熱至完全溶解，加水定容至1L，121℃滅菌20分鐘后待用；

(2)用現有常規的方法收集和萃取發酵液

將上述真菌YMF?1.00864發酵液過濾得到菌液部和菌絲體部，菌液部分減壓濃縮后用乙酸乙酯以體積比1:1萃取三次，合并乙酸乙酯部，減壓濃縮蒸干，得到真菌YMF?1.00864發酵液乙酸乙酯部粗提物。

本發明的真菌YMF?1.00864發酵液在制備分離膽酸及鵝去氧膽酸中的應用。

本發明的有效果在于：首次從真菌發酵液中生產制備膽酸及鵝去氧膽酸，由于真菌易培養，周期短及可再生，為膽酸及鵝去氧膽酸的生產提供了一條新資源以及新技術方法。

具體實施方式：