[發明專利]一種環氧化物水解酶及其編碼基因和應用

在審

• 申請號: 201410475055.8
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN104450641A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 王華磊;吳鍇;魏東芝
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N9/14
• 分類號: C12N9/14;C12N15/55;C12P41/00;C12P17/02
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄧琪;宋麗榮

1.一種環氧化物水解酶，其特征在于，所述環氧化物水解酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

2.一種環氧化物水解酶的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

3.一種根據權利要求1所述的環氧化物水解酶的應用，其特征在于，所述環氧化物水解酶以外消旋的芳香環氧化物為底物制備手性的芳香環氧化物。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述芳香環氧化物為苯基縮水甘油醚、間甲基苯基縮水甘油醚、間硝基苯基縮水甘油醚或對甲基苯基縮水甘油醚。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述底物溶解于二甲基亞砜中，所述環氧化物水解酶溶解于pH為7～8的緩沖液或純水中，兩者混合形成反應體系。

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述環氧化物水解酶的制備方法包括：S1，將來源于DSM20162?Tsukamurella?paurometabola的SEQ?ID?NO：1所示的環氧化物水解酶的基因構建載體，將載體轉化大腸桿菌；S2，獲得的重組基因工程菌進行誘導培養，培養液分離獲得含環氧化物水解酶的菌體細胞。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟S1包括：以GenBank登錄號為YP_003645475的序列設計引物SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4；以從DSM20162?Tsukamurella?paurometabola提取的基因組為模板克隆獲得全長1038bp的基因片段；經過BamHI和HindIII兩個內切酶酶切后，與對應的經過酶切的pET-28a線性化質粒連接，將連接產物轉化至克隆宿主E.coli?DH5α，獲得的單克隆過夜培養提取質粒，轉化至E.coli?BL21。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述步驟S2包括：獲得的重組基因工程菌以IPTG為誘導劑進行誘導培養，得到含有胞內表達重組質粒的重組大腸桿菌BL21的濕菌體。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述環氧化物水解酶的制備方法還包括：S3，冷凍干燥所述濕菌體得到凍干菌體。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述環氧化物水解酶的制備方法還包括：S4，破碎所述濕菌體或所述凍干菌體后得到粗酶液。

11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，所述環氧化物水解酶的制備方法還包括：S5，提純所述粗酶液得到純酶。