[發明專利]一種枯草芽孢桿菌及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201410473208.5
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN104805031A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 易虹;王敏;楊文亮;章麗;田利;崔占東;穆春;董蕾;余滿
• 申請（專利權）人: 德強生物股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P1/00;C12R1/125
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種枯草芽孢桿菌及其制備方法和用途。

背景技術

細菌性病害是危害農作物生長的一類大病害，一直都嚴重危害著農業生產；目前，常用的防治細菌性病害的藥劑主要是化學農藥，而且對有些病害防治效果一般，對生態環境及農產品質量安全影響很大。在我國至今依然十分缺乏高效、廣譜、低毒、低殘留的以防治細菌性病害為主的生物農藥。

枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，其單個細胞0.7～0.8×2～3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色，它通過競爭性生長繁殖占據生存空間的方式來阻止植物植物病原菌的生長，能在植物表面迅速形成一層保護膜，使農作物免受病原菌為害。枯草芽孢桿菌還能分泌抑菌物質，抑制病菌孢子發芽和菌絲生長。

現有技術還存在以下問題：

1、現有枯草芽孢桿菌制劑對水稻稻瘟病、水稻稻曲病、黃瓜白粉病、草莓灰霉病等多種真菌引起的植物病害有明顯的防治效果，但是并沒有廠家在細菌引起的病害上取得登記。

2、現有制備枯草芽孢桿菌的方法通常采用液體發酵取得發酵液，預處理后用碟式離心機濃縮，然后進行噴霧干燥得到原粉；發酵液經過碟式離心機分離，重液留下，輕液棄去，分離速度快但是收率低。

發明內容

針對以上問題，本發明提出了一種生長繁殖快、發酵周期短、下罐孢子數高和防治效果好，制備效率高，可以防治多種細菌性病害的枯草芽孢桿菌及其制備方法和用途。

本發明的技術方案如下：

上述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)，其保藏號為CGMCC?NO：9269。

所述枯草芽孢桿菌，其中：所述菌種屬于細菌域(Bacteria)～厚壁菌門(Firmicutes)～芽孢桿菌綱(Bacilli)～芽孢桿菌目(Bacillales)～芽孢桿菌科(Bacillaceae)～芽孢桿菌(Bacillus)～枯草芽孢桿菌(B.subtilis)，菌種代號為M22，在自然界中以活芽孢形式存在。

所述枯草芽孢桿菌，其中，所述菌種的有效成分分析方法為：采用稀釋平板法，將稀釋后菌懸液定量接種于培養基中，待枯草芽孢桿菌在培養基內長出菌落，計數枯草芽孢桿菌菌落數，以測定樣品的單位重量活芽孢數。

所述枯草芽孢桿菌，其中：所述菌種能夠用于制造孢子數為2000億活芽孢/克的原粉，雜菌率≤5％。

一種枯草芽孢桿菌的制備方法，其包括以下步驟：(1)配制菌種，即將10個克氏瓶種子加無菌水做成菌懸液，在無菌條件下接種到大罐中；(2)發酵培養基，即將含量為2.0％～3.2％且細度大于80目的啤酒酵母粉、含量為1.0％～1.6％的工業級玉米淀粉、含量為0.2％～0.6％的工業級碳酸鈣、含量為0.2％～0.6％的工業級磷酸二氫鉀、含量為0.2％～0.6％的工業級硫酸銨和含量為0.02％～0.04％的工業級消泡劑放入滅菌后體積為發酵罐60％容積的罐中，滅菌前pH7.3～7.5；然后在0～6h這段時間內保持通氣量為1∶0.6，在6～10h這段時間內保持通氣量為1∶0.7，10h至放罐通氣量為1∶1；在0～24h這段時間內溫度為31℃～32℃，24h至放罐這段時間內溫度為30℃～31℃，罐內壓力為0.05MPa，攪拌轉速為150r/min。

(3)后處理，即發酵38小時左右，鏡檢看到視野內80％以上的成熟孢子，放罐至調漿罐，調pH至5.0，加入輔料后噴霧干燥；最后，按比例加入助劑形成制劑，加入助劑將原藥稀釋為100億/克，助劑白炭黑為總質量的8％～12％，茶皂素為總質量的5％～8％，其余為硅藻土。

所述枯草芽孢桿菌的制備方法，其中，所述步驟(3)中所述輔料是由發酵液中干物質的質量百分數為：3％的木質素磺酸鈉、3％的十二烷基磺酸鈉、8％的氯化鈉和0.5％的白炭黑組成。

所述枯草芽孢桿菌的制備方法，其中：所述步驟(3)中噴霧干燥在進風溫度為140℃，出風溫度為80℃下可制成孢子數為2000億活孢子數/克的原粉。

一種枯草芽孢桿菌的用途，其中：所述菌種的搖培液對靶標菌水稻白葉枯病菌、靶標菌煙草青枯病菌、靶標菌煙草野火病菌、靶標菌柑橘潰瘍病菌和靶標菌白菜軟腐病菌均具有明顯的抑制作用。

有益效果：

本發明枯草芽孢桿菌具有有生長繁殖快、發酵周期短、下罐孢子數高和防治效果好等優點。