[發明專利]一種枯草芽孢桿菌及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201410473208.5
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN104805031A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 易虹;王敏;楊文亮;章麗;田利;崔占東;穆春;董蕾;余滿
• 申請（專利權）人: 德強生物股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P1/00;C12R1/125
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• 代理人: 暫無信息

1.一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)，其特征在于所述菌種的保藏號為CGMCC?NO：9269。

2.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌，其特征在于：所述菌種屬于細菌域(Bacteria)～厚壁菌門(Firmicutes)～芽孢桿菌綱(Bacilli)～芽孢桿菌目(Bacillales)～芽孢桿菌科(Bacillaceae)～芽孢桿菌(Bacillus)～枯草芽孢桿菌(B.subtilis)，菌種代號為M22，在自然界中以活芽孢形式存在。

3.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述菌種的有效成分分析方法為：采用稀釋平板法，將稀釋后菌懸液定量接種于培養基中，待枯草芽孢桿菌在培養基內長出菌落，計數枯草芽孢桿菌菌落數，以測定樣品的單位重量活芽孢數。

4.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌，其特征在于：所述菌種能夠用于制造孢子數為2000億活芽孢/克的原粉，雜菌率≤5％。

5.一種如權利要求1至4任意一項所述的枯草芽孢桿菌的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)配制菌種

即將10個克氏瓶種子加無菌水做成菌懸液，在無菌條件下接種到大罐中；

(2)發酵培養基

將含量為2.0％～3.2％且細度大于80目的啤酒酵母粉、含量為1.0％～1.6％的工業級玉米淀粉、含量為0.2％～0.6％的工業級碳酸鈣、含量為0.2％～0.6％的工業級磷酸二氫鉀、含量為0.2％～0.6％的工業級硫酸銨和含量為0.02％～0.04％的工業級消泡劑放入滅菌后體積為發酵罐60％容積的罐中，滅菌前pH7.3～7.5；然后在0～6h這段時間內保持通氣量為1∶0.6，在6～10h這段時間內保持通氣量為1∶0.7，10h至放罐通氣量為1∶1；在0～24h這段時間內溫度為31℃～32℃，24h至放罐這段時間內溫度為30℃～31℃，罐內壓力為0.05MPa，攪拌轉速為150r/min。

(3)后處理

即發酵38小時左右，鏡檢看到視野內80％以上的成熟孢子，放罐至調漿罐，調pH至5.0，加入輔料后噴霧干燥；

最后，按比例加入助劑形成制劑，加入助劑將原藥稀釋為100億/克，助劑白炭黑為總質量的8％～12％，茶皂素為總質量的5％～8％，其余為硅藻土。

6.如權利要求5所述的枯草芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述輔料是由發酵液中干物質的質量百分數為：3％的木質素磺酸鈉、3％的十二烷基磺酸鈉、8％的氯化鈉和0.5％的白炭黑組成。

7.如權利要求5所述的枯草芽孢桿菌的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中噴霧干燥在進風溫度為140℃，出風溫度為80℃下可制成孢子數為2000億活孢子數/克的原粉。

8.一種如權利要求1至4任意一項所述的枯草芽孢桿菌的用途，其特征在于：所述菌種的搖培液對靶標菌水稻白葉枯病菌、靶標菌煙草青枯病菌、靶標菌煙草野火病菌、靶標菌柑橘潰瘍病菌和靶標菌白菜軟腐病菌均具有明顯的抑制作用。