[發明專利]一種測定白酒中環二肽的方法

有效

• 申請號: 201410471609.7
• 申請日: 2014-09-16
• 公開（公告）號: CN104198641A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 練順才;謝正敏;廖勤儉;李楊華;彭智輔;趙東;喬宗偉;安明哲;王小琴
• 申請（專利權）人: 宜賓五糧液股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，具體涉及一種測定白酒中環二肽的方法。

背景技術

環二肽(cyclic?dipeptides)又叫2，5-二酮哌嗪等衍生物(2,5-diketopiperazine?derivatives)，該類化合物在人、脊椎動物、無脊椎動物、植物、真菌和細菌中均有發現，由于環二肽形成一個穩定的六元環結構，具有一定的構象約束作用，有兩個氫鍵給體和兩個氫鍵受體，氫鍵是藥物與受體相互作用的主要方式之一，因而環二肽在藥物化學中是一個重要的藥效團。目前發現許多環二肽具有強的生理活性，引起了有機化學家、生物學家和藥物學家的廣泛興趣。環二肽的報道不多，至今沒有查到有關白酒中環二肽的報道。

白酒是中國的國粹，是傳統固態發酵的產物，自然接種使大曲和酒糟中存在各種各樣的微生物，其中不乏真菌和細菌，尤其是發酵后期以細菌為主，加上傳統白酒獨特的蒸餾工藝，高沸點的環二肽被帶進入酒中，成為酒體的一部分。白酒中的環二肽種類很多，已檢出二十多種，但通常含量很低，在ug/L級甚至更低，少數幾個在mg/L級，從而為白酒中環二肽的檢測帶來了很大困難。

據有關報道，現有的檢測技術主要采用LC-MS-MS、核磁質譜等儀器設備來檢測，而針對白酒來說，其環二肽的相對含量較低，且樣品中的風味物質很多，難以分離，不能像文獻報道的進行純化后進行核磁質譜檢測；使用LC-MS-MS進行檢測，由于其屬于低分辨率高靈敏度的儀器，質量準確度小于2000ppm，對定性未知物易造成假陽性，必須使用標準品進行對照檢測。所以，本領域急需尋找一種能夠準確快速地檢測白酒中環二肽的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種白酒中環二肽的檢測方法。該方法包括以下步驟：

a、取白酒酒樣，過SPE?C18柱后，再用甲醇洗脫，洗脫液在溫度不高于60℃下濃縮至原白酒酒樣體積的1/50～1/10，得待測樣品；

b、將步驟a的待測樣品上樣至液相-質譜(LC-QTOF)聯用儀，質譜全離子掃描后，通過全離子掃描峰，初步得出可能存在的環二肽；

c、再將步驟a的待測樣品上樣至液相-質譜(LC-QTOF)聯用儀，針對每一種步驟b初步得出可能存在的環二肽，通過選擇離子檢測后，得到特征離子峰；

d、根據步驟c得到的特征離子峰，進一步證明白酒中是否存在步驟b初步得出的環二肽，最后得出結論。

進一步的，上述方法中，當步驟b中出現的兩個分子離子峰的相隔時間小于1min時，在步驟c進行選擇離子檢測時，對其中一個進行檢測，再重復操作步驟c，對另一個進行檢測。

進一步的，上述方法中，當步驟b中初步判斷某一時間的峰為某種環二肽的分子離子峰時，步驟c中，則在此時間正負0.5min內用此種環二肽相應的碰撞能量進行選擇離子檢測。

進一步的，上述方法中，操作步驟c時，對于液相條件，控制液相條件與步驟b相同；對于質譜條件，除步驟b采用全離子掃描、步驟c采用選擇離子檢測外，控制其它條件與步驟b相同。

進一步的，上述方法步驟b或c中，液相色譜條件為：流動相：A為0.1％甲酸水溶液，B為甲醇，梯度洗脫為：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min：停止。

更進一步的，上述方法步驟b或c中，液相色譜條件為：色譜柱為C18柱，柱長100mm，內徑2.1mm，柱溫20～30℃，流速0.1mL/min，進樣量為1～10uL。

更進一步的，上述方法步驟b或c中，液相色譜儀為美國Agilent公司1290系列高效液相色譜儀。

進一步的，上述方法步驟b中，質譜條件為：電噴霧離子源，正模式，全離子掃描，離子源溫度280～325℃，干燥氣流量5～12mL/min，霧化氣壓力30～40psig，毛細管電壓4000v，毛細管出口電壓60～150v。

進一步的，上述方法步驟c中，質譜條件為：電噴霧離子源，正模式，選擇離子檢測，離子源溫度280～325℃，干燥氣流量5～12mL/min，霧化氣壓力30～40psig，毛細管電壓4000v，毛細管出口電壓60～150v。

更進一步的，當步驟b中初步判斷某一時間的峰為環(丙氨酸-脯氨酸)的分子離子峰時，步驟c中選擇離子檢測時所需的碰撞能量為18～22v。優選為20v。