[發明專利]一種與散發型非綜合征型CHD輔助診斷相關的低頻SNV標志物及其應用

有效

• 申請號: 201410470273.2
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104263724B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 胡志斌;沈洪兵;沙家豪;陳亦江;林苑;許晶
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司32218
• 代理人: 劉成群,徐冬濤

發明領域

本發明屬于基因工程及生殖醫學領域，涉及一種與散發型非綜合征型CHD輔助診斷相關的低頻SNV標志物及其應用。

背景技術

先天性心臟病(congenital?heart?disease,CHD)是由于心臟、血管在胚胎發育過程中的障礙所致的心臟、血管形態、結構、功能、代謝上的異常。在眾多出生缺陷中，CHD占28％左右，是一種最為常見的先天性疾病。根據世界衛生組織的資料，普遍認為CHD的發病率在足月、活產的新生兒為0.60％～0.80％，在早產、死產或流產的病例中發病率則更高。據測算，我國每年新增CHD病例超過13萬例，CHD已成為我國圍產兒第一位高發畸形。自2000年起，圍產期CHD發生率呈快速上升趨勢，2011年全國CHD發生率為2000年的3.56倍。同時，CHD也是造成嬰幼兒死因或殘疾的主要原因之一，它不但嚴重危害兒童生存和生活質量，影響家庭幸福和諧，也會造成巨大的潛在壽命損失和社會經濟負擔。

流行病學研究證明，綜合征型的CHD(syndromic?CHD)占患者總數的25％左右，其余為非綜合征型CHD(non-syndromic?CHD)，即表現為心血管畸形而不伴其他系統畸形。非綜合征型CHD在人群中多數呈散發，根據左、右兩側心臟及大血管之間有無分流，可分為3大類：左向右分流型(潛伏青紫型)、右向左分流型(青紫型)、無分流型(無青紫型)。左向右分流型主要包括：VSD、PDA、ASD等。右向左分流型主要包括：法洛四聯癥和大動脈轉位等。無分流型主要包括：肺動脈口狹窄和主動脈縮窄等。引起散發型非綜合征型CHD的原因很多，包括孕母感染風疹病毒、接觸環境致畸物、孕期用藥、母體疾病、孕婦吸煙、嗜酒、吸毒、染色體異常、單基因突變以及多基因缺陷等。值得注意的是，71％患兒可存活到生育年齡以后，因此，CHD，尤其是散發型非綜合征型CHD已成為影響我國兒童身心健康及人口生存質量的重大公共衛生問題。

目前，先天性心臟病的診斷方法主要為病史詢問、體格檢查、影像學檢查(彩色多普勒超聲心動圖、X線、多層螺旋CT、磁共振成像)、心導管檢查和心血管造影、放射性核素心血管造影顯像及心電圖等。然而，現在臨床常用的檢查仍存在一些弊端：多層螺旋CT及X線對人體存在一定的輻射危害，不能作為CHD的一線影像檢查途徑；磁共振成像時間長(至少需要30分鐘)，檢查噪聲大，且病人的移動對圖像質量的影響很大，故不適用于不能合作的兒童；放射性核素心血管造影注射技術要求高；心導管檢查及心血管造影作為CHD診斷的金標準，在臨床先心病確診中居于重要地位，但其屬于有創檢查，操作復雜，有一定的手術風險性，存在引起肺水腫的可能，因此不適合作為常規篩查手段。

心臟發育是一個極其復雜的過程，其關鍵時期為受孕后2～8周，經歷了心管形成、環化、內部分隔、血管連接等過程，每個階段都受到許多重要基因和信號通路的調控。研究表明，遺傳因素是散發型非綜合征型CHD的重要病因，其中單核苷酸變異(single?nucleotide?variant,SNV)起著重要作用。SNV是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異—A,T,C或G的改變而引起的DNA序列的改變，造成包括人類在內的物種之間染色體基因組的多樣性，是人類可遺傳變異中最常見的一種。SNV的存在被認為賦予了個體不同的表型性狀，以及對于環境暴露、藥物治療等因素的不同反應性。SNV包括常見遺傳變異(common?variants)和低頻遺傳變異(rare?variants)，前者最小等位基因頻率≥5％，為低外顯率突變，而后者的最小等位基因頻率＜5％，為高外顯率突變。研究發現，人類基因組中低頻遺傳變異的數目遠超過常見遺傳變異，并且，低頻遺傳變異能解釋常見復雜疾病中相當大一部分的遺傳貢獻。因此低頻高外顯性遺傳變異可能是導致個體對常見疾病發病和預后易感性差異的重要遺傳基礎。利用疾病易感的低頻高外顯性遺傳標志物譜診斷疾病的發生，靈敏、準確和快速，具有廣闊的應用前景。近年來，利用低頻高外顯性遺傳標志物診斷疾病的發生發展已經成為臨床和科研工作者的研究熱點，在腫瘤和心血管疾病等常見重大疾病的應用價值已初見端倪。

然而，目前還沒有將低頻高外顯性遺傳標志物應用于散發型非綜合征型先天性心臟病診斷的報道，若能篩選出散發型非綜合征型先天性心臟病易感的低頻高外顯性遺傳標志物作為生物標志物，并研制相應的診斷試劑盒，對我國散發型非綜合征型先天性心臟病診斷現狀必將是一次有力的推動，也為其藥物篩選、藥效評價及靶向治療開辟了新的途徑。

發明內容