[發明專利]可可粉中活性成分的指紋圖譜測定方法

無效

• 申請號: 201410470234.2
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104215711A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 朱穎;鄭翊;李丹
• 申請（專利權）人: 湖北中煙工業有限責任公司;武漢市黃鶴樓科技園有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝;孫林

技術領域

本發明涉及可可粉的質量控制方法，具體地指一種可可粉中活性成分的指紋圖譜測定方法。

背景技術

可可粉為梧桐科可可屬植物可可樹的種子可可(Theobroma?cacao?Linn.)經加工而成的粉末?？煽蓸湓a于南美洲亞馬遜河上游的熱帶雨林地區，現主要分布在印度尼西亞、加納、東南亞、西非等赤道南北緯10°以內的狹窄地帶，我國海南有引進栽種?？煽煞劬哂锌寡趸?、調節免疫、調節血糖水平、降低血漿膽固醇、抗齲齒、助消化等多種生理功效，現已廣泛應用于巧克力、糕點、冰激凌、飲料等食品行業。現代研究表明，可可粉中所含有的表兒茶素是其多酚類生理活性物質的主要有效成分之一，能有效地抑制包括糖尿病、心臟病、中風、癌癥等在內的多種疾病，具有調節血小板、保護心血管系統、改善視力、降血壓、抗氧化等多種生理功效。

但目前我國可可制品所執行的行業標準僅對可可粉感官指標、理化指標及微生物指標進行了相關規定，未能反映可可粉的內在質量，不能對其質量進行有效控制。

指紋圖譜作為一種綜合鑒定手段，以樣品中化學成分系統研究為基礎，能全面的反映樣品中所含化學成分的種類和含量，可用于對樣品的真實性、特征性和優良性等進行評價，是樣品質量控制的主要方法之一，現已成為國際公認的質量控制最有效技術之一。目前，指紋圖譜作為可可粉的質量控制手段僅對其多糖和脂類成分進行了研究，尚無基于可可粉中主要活性成分指紋圖譜的相關研究。

發明內容

本發明為了全面評價可可粉活性成分的變化及差異，提供一種可可粉中活性成分的指紋圖譜測定方法。

為實現上述目的，本發明所提供的可可粉中活性成分的指紋圖譜測定方法，它包括以下步驟：

(a)對照品溶液的制備：精密稱取表兒茶素對照品，加入甲醇與水體積比為1:1的溶液溶解，制成每1mL含表兒茶素66μg的溶液，即得；

(b)供試品溶液的制備：精密稱取可可粉0.25～2.5g，加入甲醇與水體積比為1:1的溶液50～500mL，超聲提取30～60min，過濾，取續濾液，即得；

(c)設定色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相A為乙腈，流動相B為質量百分數為0.05％磷酸緩沖鹽溶液；采用梯度洗脫方式，其洗脫程序為：

0min→20min，流動相A為10％→15％、流動相B為90％→85％，

20min→30min，流動相A為15％→30％、流動相B為85％→70％；

檢測波長210nm，流速為0.8mL/min，柱溫30℃；理論塔板數按表兒茶素峰計，不低于6000；

(d)標準指紋圖譜的獲得：精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μL，按照設定的色譜條件，注入高效液相色譜儀，通過對照品表兒茶素的色譜峰，確定供試品溶液色譜圖中的表兒茶素峰，按照色譜圖方法學考察的方法得到可可粉的標準指紋圖譜；

(e)色譜分析：將每批次所得的供試品溶液的指紋圖譜與可可粉標準指紋圖譜經中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統比較，來確定可可粉的質量。

本發明所得到的可可粉的標準指紋圖譜檢測出5個特征指紋峰，5號峰為表兒茶素，

1號峰：保留時間：4.82±0.2min，

2號峰：保留時間：6.87±0.2min，

3號峰：保留時間：14.64±0.2min，

4號峰；保留時間：17.52±0.2min，

5號峰：保留時間：21.13±0.2min。

本發明的有益效果：本發明采用高效液相色譜法對可可粉活性成分的指紋圖譜進行了研究，將所得的供試品溶液的指紋圖譜與可可粉標準指紋圖譜經中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統試驗。本發明具有以下優點：

①本發明建立的色譜方法具有精密度高、穩定性好、重復性好的優點，符合指紋圖譜的要求，可作為可可粉質量檢測方法，全面監控可可粉的質量；

②本發明能將可可粉活性成分進行有效分離，構建了可可粉的指紋圖譜，填補了可可粉在活性成分分離和指紋圖譜中研究的空白；

③對可可粉的質量評價不再局限于對某一種成分的研究，而是從整體評價，應用指紋圖譜特征對可可粉的質量進行全面控制，確保可可粉的保健功效及可可制品的質量與安全，提供了一種有效的產品質量檢測方法和工藝技術創新的評價平臺。

附圖說明

圖1為對照品表兒茶素的色譜圖。

圖2為可可粉的標準指紋圖譜。

圖3為十批可可粉指紋圖譜疊加圖。

具體實施方式