[發(fā)明專利]一種具有免疫活性的新型紅托竹蓀多糖及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410470022.4
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104262500B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發(fā)明（設計）人: 楊繼國;林澤華;廖文鎮(zhèn);任嬌艷;張榕;寧正祥
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P37/02;A61P35/00;A23L33/125
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種具有免疫活性的新型紅托竹蓀多糖的制備方法，其特征在于，以紅托竹蓀為原料，經(jīng)過如下方法制備：熱水浸提、Savege法除蛋白、乙醇沉淀，然后采用離子交換柱層析、凝膠過濾柱層析、超濾分離、凝膠過濾柱層析四步分離法分離純化后獲得。

2.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

（1）將紅托竹蓀子實體于40?~?70?℃干燥0.5?~?4?h，然后用打粉機粉碎；

（2）熱水浸提1?~?4?h，料液比為1?:?20?~?1?:?40?g/mL，溫度為60?~?100?℃，浸提次數(shù)為1?~?3次；

（3）采用Sevage法對熱水浸提物進行脫蛋白處理6?~?10次，收集上層多糖溶液然后進行濃縮和干燥，得到脫除蛋白后的粗多糖溶液；

（4）往脫除蛋白后的粗多糖溶液中加入乙醇溶液，于0?~?4?℃下靜置過夜，4000?~?8000?r/min離心10?~?20?min，收集沉淀物，真空冷凍干燥后得到紅托竹蓀粗多糖；

（5）采用四步分離法進行分離純化：分離純化步驟為：首先采用離子交換柱層析對步驟（4）得到的紅托竹蓀粗多糖進行純化，用去離子水和0.05?~?2?mol/L的NaCl溶液進行梯度洗脫，收集洗脫液，透析、濃縮后冷凍干燥；然后采用凝膠過濾柱層析，以去離子水作洗脫劑，透析、濃縮后冷凍干燥；再采用超濾分離技術進行純化，分別收集透過液和截留液，濃縮后冷凍干燥；最后采用凝膠過濾柱層析，以去離子水作洗脫劑，透析、濃縮后冷凍干燥，得到紅托竹蓀多糖。

3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，所用到的乙醇的體積分數(shù)為65%?~95%或者是使用無水乙醇，乙醇的加入量為粗多糖溶液體積的1?~?5倍。

4.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（5）中，采用離子交換柱層析、凝膠過濾柱層析、超濾分離、凝膠過濾柱層析四步分離法進行分離純化，四步分離法的實施方式為如下方式中的一種：

方式一，采用DEAE-52或?DEAE?Sepharose?FF陰離子交換柱層析，?Sephadex?G-200或Sephadex?G-150凝膠過濾柱層析，超濾分離，Sephadex?G-100凝膠過濾柱層析；

方式二，采用DE?52或QA?52陰離子交換柱層析，Sephadex?G-200或Sephadex?G-150凝膠過濾柱層析，超濾分離，Sephadex?G-100凝膠過濾柱層析；

方式三，DEAE-52或Sepharose?XL陰離子交換柱層析，Sephadex?G-200或Sepharose?Fast?Flow凝膠過濾柱層析，超濾分離，?Superose?12或Bio-Gel?P-4凝膠過濾柱層析；

方式四，Sepharose?XL或CM52陰離子交換柱層析，Sepharose?2B或Sepharose?4B凝膠過濾柱層析，超濾分離，Sepharose?6B或Sephacryl?S-400?HR凝膠過濾柱層析。

5.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（5）的超濾分離中，所采用的超濾膜的截留相對分子質(zhì)量為20?~?1000?kDa。

6.由權利要求1-5任一項所述制備方法制備得到一種具有免疫活性的新型紅托竹蓀多糖。

7.權利要求6所述的新型紅托竹蓀多糖應用于免疫缺陷類疾病及腫瘤的藥物制備。

8.權利要求6所述的新型紅托竹蓀多糖應用于制備提高免疫功能的食品或保健食品。