[發明專利]以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法

有效

• 申請號: 201410468937.1
• 申請日: 2014-09-13
• 公開（公告）號: CN104198454B
• 公開（公告）日: 2016-11-09
• 發明（設計）人: 陳偉;鄧豪華;林逢林;何少斌;彭花萍
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是利用脲酶特異性催化尿素生成氨和二氧化碳的體系，新生成的氨能提高所述體系的pH值，使N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇的熒光發生猝滅，從而表現出熒光發射光譜特征的變化，能直接用于尿素的含量測定。

2.根據權利要求1所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所述金納米團簇溶液，脲酶溶液和尿素測定液按體積比為4：4：1混合，25°C反應40分鐘測定發射光強度值F₆₅₀以判斷尿素的濃度。

3.根據權利要求1或2所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所使用的脲酶濃度為10?U/mL。

4.根據權利要求3所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將濃度為0.02~0.18?mol/L?的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液和濃度為0.1~0.8?mol/L的氫氧化鈉溶液加入到濃度為0.01~0.1?g/L的氯金酸溶液中，混勻，置于20~70°C水浴恒溫反應0~3.5小時，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行透析純化處理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸-金納米團簇熒光材料水溶液。

5.根據權利要求4所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將0.6?mL濃度為0.5?mol/L的氫氧化鈉溶液與0.4?mL濃度為0.02?g/L的氯金酸溶液加入到4?mL濃度為0.08?mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混勻，置于37°C恒溫水浴槽中反應2.5?h，反應液由淺黃色變為無色，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行純化處理得到N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇溶液。

6.根據權利要求4或5所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是利用N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇在650?nm處的發射光強度值（F₆₅₀）以判斷尿素含量，所使用的激發波長為355?nm。

7.根據權利要求6所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是將金納米團簇溶液和脲酶溶液混合均勻后，將不同濃度尿素溶液加入到上述混合液中，在25°C的恒溫水浴槽中反應后，測定發射光強度值F₆₅₀，在尿素濃度為0.055~0.55mmol/L的范圍內F₆₅₀與尿素濃度呈線性關系，檢測限為0.055mmol/L。

8.一種以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，包括如下步驟：取新鮮人尿液，用pH=6.0的緩沖液稀釋，取0.05?mL稀釋液加入到由0.2?mL?N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇溶液和0.2?mL、濃度為10?U/mL的脲酶溶液組成的混合液中，在25°C的恒溫水浴槽中反應40分鐘，測定發射光強度值F₆₅₀，通過標準曲線進行定量，獲得尿液中的尿素含量。

9.根據權利要求8所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將0.6?mL濃度為0.5?mol/L的氫氧化鈉溶液與0.4?mL濃度為0.02?g/L的氯金酸溶液加入到4?mL濃度為0.08?mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混勻，置于37°C恒溫水浴槽中反應2.5?h，反應液由淺黃色變為無色，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行純化處理，純化后的金納米團簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。

10.根據權利要求8或9所述的以熒光金納米團簇為探針的尿素測定方法，其特征是所述的新鮮人尿液為用pH=6.0的醋酸鹽緩沖液稀釋200倍后選取的0.05?mL稀釋液。