[發(fā)明專利]一種優(yōu)化大花蕙蘭類原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410467924.2
• 申請(qǐng)日: 2014-09-15
• 公開（公告）號(hào): CN104255708A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張荻;王路堯;陳冠群;任麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N3/00
• 分類號(hào): A01N3/00
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所 31219
• 代理人: 梁海蓮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物或其局部的保存領(lǐng)域，具體涉及一種優(yōu)化大花蕙蘭類原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法。

背景技術(shù)

超低溫保存是上世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)現(xiàn)代種質(zhì)資源離體保存技術(shù)。通常在液氮中保存，被保存材料細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)代謝和生長(zhǎng)活動(dòng)幾乎完全停止，處在相對(duì)穩(wěn)定的生物學(xué)狀態(tài)，達(dá)到長(zhǎng)期保存種質(zhì)的目的，超低溫保存是目前唯一不需要連續(xù)繼代的中長(zhǎng)期保存方式。玻璃化法超低溫保存是將細(xì)胞或組織置于由一定比例的滲透性和非滲透性保護(hù)劑組成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足夠快的降溫速率下固化成非結(jié)晶的玻璃化態(tài)，并以這種玻璃態(tài)在低溫下保存。玻璃化法因操作簡(jiǎn)單快捷，成本低，適宜保存種類廣泛，保存材料遺傳性穩(wěn)定，保存效果好等優(yōu)點(diǎn)，是近十年來(lái)用于優(yōu)良種質(zhì)資源中長(zhǎng)期保存的首選方法。

蘭科是被子植物中的第一大科，作為一種重要的觀賞植物資源，在園林和觀賞園藝的發(fā)展過(guò)程中占據(jù)重要地位。大花蕙蘭是對(duì)蘭屬中通過(guò)人工雜交培育出的、色澤艷麗、花朵碩大的品種的一個(gè)統(tǒng)稱。目前，已成功實(shí)現(xiàn)超低溫保存的蘭科植物種類包括金釵石斛、鐵皮石斛、大花萬(wàn)代蘭、血色石斛、舌唇蘭屬、矮萬(wàn)代蘭等。已初步建立的大花蕙蘭類原球莖玻璃化法超低溫保存體系的相對(duì)成活率僅為10％，還不足以滿足生產(chǎn)與科研的需求。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種新的優(yōu)化大花蕙蘭類原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)中植物種質(zhì)資源中長(zhǎng)期保存難以實(shí)現(xiàn)，以及超低溫保存的植物或其組織恢復(fù)生長(zhǎng)率低的缺點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的或者其他目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種優(yōu)化大花蕙蘭類原球莖玻璃化超低溫保存保存效果的方法，采用玻璃化超低溫保存的方法對(duì)大花蕙蘭類原球莖進(jìn)行保存，具體步驟如下：

1)預(yù)培養(yǎng)：將大花蕙蘭類原球莖置于預(yù)培養(yǎng)基上，在光照培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)1～5天；

2)裝載液處理：室溫下，將大花蕙蘭類原球莖在裝載液中浸泡脫水處理40～60分鐘后移除裝載液；

3)玻璃化溶液處理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脫水處理大花蕙蘭類原球莖40～60分鐘；

4)液氮保存：保持大花蕙蘭類原球莖浸泡在玻璃化溶液中的狀態(tài)，將其置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液為含有0.1～0.5g/L石墨烯量子點(diǎn)的玻璃化冷凍保護(hù)液。

所述MS培養(yǎng)液含有1900mg/L?KNO₃，1650mg/L?NH₄NO₃，170mg/L?KH₂PO₄，370mg/L?MgSO₄·7H₂O，440mg/L?CaCl₂·2H₂O，37.3mg/L?Na₂-EDTA，27.8mg/L?FeSO₄·7H₂O，100mg/L肌醇，0.5mg/L煙酸，0.5mg/L鹽酸吡哆醇，0.1mg/L鹽酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0.83mg/L?KI，6.2mg/L?H₃BO₃，22.3mg/L?MnSO₄·4H₂O，8.6mg/L?ZnSO₄·7H₂O，0.25mg/L?Na₂MoO₄·2H₂O，0.025mg/L?CuSO₄·5H₂O，0.025mg/L?CoCl₂·6H₂O，余量為水。

所述MS培養(yǎng)液的pH為5.8。

優(yōu)選地，上述步驟1)中所述大花蕙蘭類原球莖為在含有40～80g/L的山梨醇的MS固體培養(yǎng)基上光照預(yù)培養(yǎng)后的大花蕙蘭類原球莖。

優(yōu)選地，上述步驟1)中所述大花蕙蘭類原球莖為在含有60g/L的山梨醇的MS固體培養(yǎng)基上光照預(yù)培養(yǎng)后的大花蕙蘭類原球莖。