[發(fā)明專(zhuān)利]一種優(yōu)化大花蕙蘭類(lèi)原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410467924.2
• 申請(qǐng)日: 2014-09-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104255708A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張荻;王路堯;陳冠群;任麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01N3/00
• 分類(lèi)號(hào): A01N3/00
• 代理公司: 上海光華專(zhuān)利事務(wù)所 31219
• 代理人: 梁海蓮

1.一種優(yōu)化大花蕙蘭類(lèi)原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低溫保存的方法對(duì)大花蕙蘭類(lèi)原球莖進(jìn)行保存，具體步驟如下：

1)預(yù)培養(yǎng)：將大花蕙蘭類(lèi)原球莖置于預(yù)培養(yǎng)基上，在光照培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)1～5天；

2)裝載液處理：室溫下，將大花蕙蘭類(lèi)原球莖在裝載液中浸泡脫水處理40～60分鐘后移除裝載液；

3)玻璃化溶液處理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脫水處理大花蕙蘭類(lèi)原球莖40～60分鐘；

4)液氮保存：保持大花蕙蘭類(lèi)原球莖浸泡在玻璃化溶液中的狀態(tài)，將其置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液為含有0.1～0.5g/L石墨烯量子點(diǎn)的玻璃化冷凍保護(hù)液。

2.如權(quán)利要求1所述優(yōu)化大花蕙蘭類(lèi)原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法，其特征在于，所述大花蕙蘭類(lèi)原球莖預(yù)培養(yǎng)基為含有40～80g/L山梨醇的MS固體培養(yǎng)基。

3.如權(quán)利要求1所述優(yōu)化大花蕙蘭類(lèi)原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法，其特征在于，所述裝載液為含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L?KNO₃的MS培養(yǎng)液。

4.如權(quán)利要求1所述優(yōu)化大花蕙蘭類(lèi)原球莖玻璃化超低溫保存效果的方法，其特征在于，所述玻璃化溶液為含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亞砜、0.4mol/L蔗糖和0.1～0.5g/L石墨烯量子點(diǎn)的MS培養(yǎng)液。

5.一種大花蕙蘭類(lèi)原球莖的解凍及再培養(yǎng)方法，所述大花蕙蘭類(lèi)原球莖為采用如權(quán)利要求1～4任一權(quán)利要求所述方法保存的大花蕙蘭類(lèi)原球莖，所述大花蕙蘭類(lèi)原球莖的解凍及再培養(yǎng)方法為將大花蕙蘭類(lèi)原球莖從液氮中取出，先水浴解凍，然后去除玻璃化溶液后用洗滌液洗滌，最后轉(zhuǎn)入恢復(fù)培養(yǎng)基中恢復(fù)培養(yǎng)。

6.如權(quán)利要求5所述解凍及再培養(yǎng)方法，其特征在于，水浴解凍的條件為在30～40℃的水浴中解凍60～120s。

7.如權(quán)利要求5所述解凍及再培養(yǎng)方法，其特征在于，所述洗滌液為含有1.0～1.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L?KNO₃的MS培養(yǎng)液洗滌，洗滌工藝為：用洗滌液在室溫下將大花蕙蘭類(lèi)原球莖浸泡10～30分鐘。