[發明專利]一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法

在審

• 申請號: 201410466737.2
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104255807A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 童應華;李萬里;包亞星
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P7/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及生物防治及微生物領域，特別涉及一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法。?

背景技術

假眼小綠葉蟬(EmpoascavitisGothe)屬同翅目(Homoptera)葉蟬科(Icadellidae)小綠葉蟬屬(Empoascaspp.),是中國茶樹主要害蟲之一。其若蟲、成蟲均危害刺吸茶樹嫩梢芽葉汁液，輕者茶樹嫩梢、芽、葉形成褐色斑點，重者導致焦枯。同時，該刺吸性害蟲也是茶樹病害的病原菌傳播的主要媒介。該蟲分布廣，世代重疊復雜，目前主要以化學防治為主，化學試劑的長期使用使其產生程度不一的抗藥性。昆蟲病原真菌主要通過體壁侵染，對刺吸式口器的昆蟲有較好的效果。球孢白僵菌是一種運用較為廣泛的病原真菌，其對鱗翅目、鞘翅目、同翅目以及螨類均有較好的防治效果。本發明以球孢白僵菌不同菌株對假眼小綠葉蟬成蟲進行處理及毒力的測定，旨在篩選出對其致病力強的菌株，為該害蟲的生物防治提供重要的菌株資源和新的有效防治途徑。?

發明內容

為解決上述現有技術存在的問題，本發明的目的在于提供一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法，白僵菌BLK菌劑能夠有效?防治假眼小綠葉蟬蟲害，本發明采用生物防治，防治方法安全、環保，對茶樹無副作用，方法操作簡單，易于推廣，成本較低。?

為達到上述目的，本發明的技術方案為：?

一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法，包括如下步驟：?

步驟一、球孢白僵菌及假眼小綠葉蟬準備?

將球孢白僵菌在斜面培養基上充分產孢后，用10mL的0.05％Tween80無菌水洗下,置于振蕩器上振蕩20min(180r/min)，血球計數板計數；將各菌株配制成濃度為(1±0.5)×10⁷孢子/mL的孢子懸液備用；?

采用掃網法從茶園采集假眼小綠葉蟬，并用自制吸蟲器吸入透氣的廣口玻璃瓶內(D＝7.2cm；H＝9.6cm)，以帶嫩葉和幼芽的新鮮茶樹枝條(5-6cm)室內飼養；?

步驟二、接菌選擇飼養了2d的健康成蟲作為供試蟲；采用自制的微型噴菌器，以(1±0.5)×10⁷孢子/mL孢子懸液噴霧法接菌；每個廣口瓶裝40-50頭成蟲后，置于噴霧器正下方，垂直噴菌3下；并在廣口瓶底部放入血球計數板，以同樣的方法模擬噴菌，統計單位面積的接菌量；?

步驟三、接菌后的試蟲飼養在已滅菌的培養皿中放入酒精瓶蓋，瓶蓋中以浸泡無菌水的脫脂棉填滿，用橡皮筋將5-6cm的鮮嫩茶樹枝條扎成束后，直插于脫脂棉上，將接菌后的廣口瓶倒扣于培養皿中，貼好標簽，于(25±1)℃，相對濕度(95±1)％的人工氣候箱中飼養，2d更換1次鮮嫩枝葉，并在脫脂棉中滴入適量無菌水保?濕，每菌株為一處理，每個處理設5個重復，每重復接菌40-50頭成蟲；每12h觀察、記錄1次各處理假眼小綠葉蟬的死亡情況，并及時將死蟲轉入無菌培養皿內，用浸泡過無菌室的脫脂棉保濕，置于(25±1)℃的恒溫培養箱中培養，觀察死蟲表面菌絲生長和產孢情況；統計各處理假眼小綠葉蟬死亡數和僵蟲數，蟲尸上長出肉眼可見的菌絲及孢子為有效致死，僵蟲判斷標準參照童應華等和何學友等的方法；以噴等量的0.05％的Tween80無菌水處理作為對照；?

步驟四、高致病力菌株致死中濃度(LC₅₀)的測定?

選擇致病力較強，且僵蟲率較高的菌株，分別以(1±0.5)×10⁸、(1±0.5)×10⁷、(1±0.5)×10⁶、(1±0.5)×10⁵、(1±0.5)×10⁴孢子/mL的5個濃度梯度孢子懸液噴霧法接種，每個濃度梯度5個重復,每個重復測定40-50頭健康成蟲,以0.05％Tween80無菌水作為對照。飼養、觀察和記錄的方法同步驟三。?

進一步的，所述步驟一中，供試球孢白僵菌包括BLK菌株、BB菌株、B3菌株、B187菌株、BNH-04菌株。?

進一步的，所述步驟二中，單位面積接菌量為(37.0±0.5)孢子/mm2。?

相對于現有技術，本發明的有益效果為：?