[發明專利]一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法

在審

• 申請號: 201410466737.2
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104255807A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 童應華;李萬里;包亞星
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P7/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種利用球孢白僵菌治理假眼小綠葉蟬的方法，包括如下步驟：

步驟一、球孢白僵菌及假眼小綠葉蟬準備

將球孢白僵菌在斜面培養基上充分產孢后，用10mL的0.05％Tween80無菌水洗下,置于振蕩器上180r/min振蕩20min，血球計數板計數；將各菌株配制成濃度為(1±0.5)×10⁷孢子/mL的孢子懸液備用；

用掃網法從茶園采集假眼小綠葉蟬，并用自制吸蟲器吸入透氣的D＝7.2cm；H＝9.6cm廣口玻璃瓶內，以帶嫩葉和幼芽的5-6cm新鮮茶樹枝條室內飼養；

步驟二、接菌選擇飼養了2d的健康成蟲作為供試蟲；采用自制的微型噴菌器，以(1±0.5)×10⁷孢子/mL孢子懸液噴霧法接菌；每個廣口瓶裝40-50頭成蟲后，置于噴菌器正下方，垂直噴菌3下；并在廣口瓶底部放入血球計數板，以同樣的方法模擬噴菌，統計單位面積的接菌量；

步驟三、接菌后的試蟲飼養在已滅菌的培養皿中放入酒精瓶蓋，瓶蓋中以浸泡無菌水的脫脂棉填滿，用橡皮筋將5-6cm的鮮嫩茶樹枝條扎成束后，直插于脫脂棉上，將接菌后的廣口瓶倒扣于培養皿中，貼好標簽，于(25±1)℃，相對濕度(95±1)％的人工氣候箱中飼養，2d更換1次鮮嫩枝葉，并在脫脂棉中滴入適量無菌水保濕，每菌株為一處理，每個處理設5個重復，每重復接菌40-50頭成蟲；每12h觀察、記錄1次各處理假眼小綠葉蟬的死亡情況，并及時將死蟲轉入無菌培養皿內，用浸泡過無菌室的脫脂棉保濕，置于(25±1)℃的恒溫培養箱中培養，觀察死蟲表面菌絲生長和產孢情況；統計各處理假眼小綠葉蟬死亡數和僵蟲數，蟲尸上長出肉眼可見的菌絲及孢子為有效致死，僵蟲判斷標準參照童應華等和何學友等的方法；以噴等量的0.05％的Tween80無菌水處理作為對照；

步驟四、高致病力菌株致死中濃度(LC₅₀)的測定

選擇致病力較強，且僵蟲率較高的菌株，分別以(1±0.5)×10⁸、(1±0.5)×10⁷、(1±0.5)×10⁶、(1±0.5)×10⁵、(1±0.5)×10⁴孢子/mL的5個濃度梯度孢子懸液噴霧法接種，每個濃度梯度5個重復,每個重復測定40-50頭健康成蟲,以0.05％Tween80無菌水作為對照；飼養、觀察和記錄的方法同步驟三。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟一中，供試球孢白僵菌包括BLK菌株、BB菌株、B3菌株、B187菌株、BNH-04菌株。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟二中，單位面積接菌量為36.5-37.5孢子/mm²。