[發明專利]一種胡黃連懸浮細胞的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410463224.6
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104170748A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及組培條件下胡黃連懸浮細胞的培養，屬于生物技術領域。

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背景技術

胡黃連，Picrorhiza?scrophulariiflora?Pennell.，玄參科，又名割孤露澤、胡連、多年生草本，有毛，生于海拔3600-4400m的高寒地區的巖石上及石堆中、淺土層的向陽處或生于高山草地，產于印度、印度尼西亞，國內主產于西藏，主治：陰虛骨蒸；潮熱盜汗；小兒疳疾；濕熱瀉??；黃疸；吐血；衄血；目赤腫?痛；癰腫瘡瘍；痔瘡腫毒，生物學特性喜涼爽濕潤、土質肥沃，適合在高海拔地段栽培。目前主要的栽培技術為種子繁殖，選成熟的種子，在秋末播種，事前做苗床，床面高出地面20cm，隨當地的地形做成長方形，四周設排水漢，播種后覆土，蓋草保濕防寒，翌年春天出苗。利用細胞培養技術可以獲得大量的胡黃連懸浮細胞，且不受季節、地域的限制。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供胡黃連懸浮細胞培養的快速繁殖方法，工藝流程簡單，不受地域，季節等自然環境因素影響等優點，有利于建立胡黃連懸浮細胞的大規模工廠化生產。

為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案：

選用胡黃連幼嫩的葉片，用去污皂刷洗8分鐘，自來水沖洗20分鐘，在超凈工作臺上用3％的次氯酸鈉消毒9分鐘，無菌水沖洗5次，接種在B₅+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4-D3.0mg/L+DTT10mmol/L培養基上進行愈傷組織誘導培養，條件為光照強度1000lx，光照7h/d，溫度22℃，濕度40%，將誘導出來的愈傷組織接入培養基B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L培養基中進行愈傷組織增殖培養，增殖培養培養40天后接入B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L+CuCl₂5-15μmol/L+水解酪蛋白80-100mg/L的液體培養基中進行懸浮細胞培養，培養條件為光照強度3000lx，光照15h/d，溫度25℃，濕度60%，15天繼代一次，洗滌，60℃烘干至恒重稱量，得干重。

采用本發明制備的胡黃連懸浮細胞，產量大，能耗少，生長周期短，次生代謝物產量高。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

選用胡黃連幼嫩的葉片，用去污皂刷洗8分鐘，自來水沖洗20分鐘，在超凈工作臺上用3％的次氯酸鈉消毒9分鐘，無菌水沖洗5次，接種在B₅+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4-D3.0mg/L+DTT10mmol/L培養基上進行愈傷組織誘導培養，條件為光照強度1000lx，光照7h/d，溫度22℃，濕度40%，將誘導出來的愈傷組織接入培養基B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L培養基中進行愈傷組織增殖培養，增殖培養培養40天后接入B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L+CuCl₂5μmol/L+水解酪蛋白80mg/L的液體培養基中進行懸浮細胞培養，培養條件為光照強度3000lx，光照15h/d，溫度25℃，濕度60%，15天繼代一次，洗滌，60℃烘干至恒重稱量，得干重，懸浮細胞增長率69%。

實施例2