[發明專利]一種水蓑衣懸浮細胞培養的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410463195.3
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104170747A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及水蓑衣懸浮細胞培養的快繁方法，屬于植物技術領域。

背景技術

水蓑衣，HygropHila?salicifolia(Vahl)，草本，爵床科，又名穿心蛇、魚骨草、九節花、墨菜。產廣東、廣西、海南、臺灣、香港、福建、江西、浙江、安徽、湖南、湖北、四川、云南等省區。生于溪溝邊或洼地等潮濕處。亞洲東南部至東部舊本琉球）有分布，以全草入藥。全年可采，鮮用，或洗凈曬干。清熱解毒，化瘀止痛。用于咽喉炎，乳腺炎，吐血，衄血，百日咳；外用治骨折，跌打損傷，毒蛇咬傷，組培方法研究目前尚處于起步階段，懸浮細胞培養還無人研究，懸浮細胞具有操作簡單可控，生產成本低，繁殖率高等優點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種水蓑衣懸浮細胞的快速繁殖方法，由該方法所制備得到的水蓑衣懸浮細胞生長分裂速度快，操作工藝簡單可控，有助于獲得大量的藥用次生代謝產物，且生長周期短。

本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的：

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的葉片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水沖洗18min，超凈工作臺上10%安替福民溶液+兩滴吐溫-80消毒10min，無菌水沖洗5-7遍，吸水紙吸去表面水分，消毒處理過的葉片接種入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%瓊脂中進行愈傷組織誘導，光照強度600lx，光期5h，暗期19h，誘導出來的水蓑衣愈傷組織接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）進行愈傷組織的誘變增殖，pH5.8，光照1200lx，溫度28℃，增殖后篩選嫩綠松散的愈傷組織接入液體培養基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂+60mg/L酵母，30天后稱重，計算增殖率。

采用本發明制備的水蓑衣懸浮細胞增殖速度快，細胞中次生代謝物含量高，生產成本低，且生長周期短。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的葉片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水沖洗18min，超凈工作臺上10%安替福民溶液+兩滴吐溫-80消毒10min，無菌水沖洗5-7遍，吸水紙吸去表面水分，消毒處理過的葉片接種入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%瓊脂中進行愈傷組織誘導，光照強度600lx，光期5h，暗期19h，誘導出來的水蓑衣愈傷組織接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）進行愈傷組織的誘變增殖，pH5.8，光照1200lx，溫度28℃，增殖后篩選嫩綠松散的愈傷組織接入液體培養基N₆+2，4-D0.5mg/L+6-BA4.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂+50mg/L酵母，30天后稱重，計算增殖率。

實施例2

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的葉片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水沖洗18min，超凈工作臺上10%安替福民溶液+兩滴吐溫-80消毒10min，無菌水沖洗5-7遍，吸水紙吸去表面水分，消毒處理過的葉片接種入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%瓊脂中進行愈傷組織誘導，光照強度600lx，光期5h，暗期19h，誘導出來的水蓑衣愈傷組織接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）進行愈傷組織的誘變增殖，pH5.8，光照1200lx，溫度28℃，增殖后篩選嫩綠松散的愈傷組織接入液體培養基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂+80mg/L酵母，30天后稱重，計算增殖率。

實施例3

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的葉片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水沖洗18min，超凈工作臺上10%安替福民溶液+兩滴吐溫-80消毒10min，無菌水沖洗5-7遍，吸水紙吸去表面水分，消毒處理過的葉片接種入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%瓊脂中進行愈傷組織誘導，光照強度600lx，光期5h，暗期19h，誘導出來的水蓑衣愈傷組織接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）進行愈傷組織的誘變增殖，pH5.8，光照1200lx，溫度28℃，增殖后篩選嫩綠松散的愈傷組織接入液體培養基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA4.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂+60mg/L酵母，30天后稱重，計算增殖率。