[發明專利]一種水蓑衣懸浮細胞培養的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410463195.3
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104170747A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.?一種水蓑衣懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變增殖、懸浮細胞的培養，其主要步驟如下：

（1）采取水蓑衣幼嫩的葉片，在超凈工作臺上對其進行消毒處理；

（2）取步驟（1）消毒處理過的葉片接種入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%瓊脂中進行愈傷組織誘導，光照強度600lx，光期5h，暗期19h；

（3）取步驟（2）中誘導出來的水蓑衣愈傷組織接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）進行愈傷組織的誘變增殖，pH5.8，光照1200lx，溫度28℃；

（4）取步驟（3）增殖后篩選嫩綠松散的愈傷組織接入液體培養基N₆+2，4-D0.5-1.0mg/L+6-BA4.0-5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂+50-80mg/L酵母，30天后稱重，計算增殖率。

2.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述水蓑衣無菌葉片的獲得為，取水蓑衣新抽稍上幼嫩的葉片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水沖洗18min，超凈工作臺上10%安替福民溶液+兩滴吐溫-80消毒10min，無菌水沖洗5-7遍，吸水紙吸去表面水分。

3.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（3）中附加了誘變劑甲基磺酸乙酯，可促進愈傷組織的增殖和產生此生代謝物含量高的細胞株。