[發明專利]一種柳蘭懸浮細胞的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410463061.1
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104255463A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及柳蘭懸浮細胞的快繁方法，屬于植物技術領域。

背景技術

柳蘭，Epilobium?angustifolium?Linn.，柳葉菜科，多年生草本，高約1-1.3米。莖直立，通常不分枝。葉互生，披針形，總狀花序頂生，伸長，花序軸被短柔毛，苞片線形，長1-2厘米，花大，兩性，紅紫色。根、莖、葉、花、果均含鞣質，分布于我國西南、西北、華北至東北；北溫帶廣布，北美洲、歐洲至日本，自然生于海拔較高的林緣、林間、山坡草地、河岸草叢及火燒或采伐跡地。耐寒。喜涼爽、濕潤氣候及濕潤、肥沃、排水良好的土壤。稍耐陰。畏炎熱、干旱的環境。柳蘭全草70%丙酮提取物中分得9個鞣質類及其他酚性化合物，分別鑒定為3-氧-沒食子酰基-D-葡萄糖、1，6-二-氧-沒食子酰基-β-D-吡喃型葡萄糖、1-氧-沒食子酰基-4，6-六羥基聯苯甲酰基-β-D-吡喃型葡萄糖、水楊梅丁素、英國櫟鞣花酸、特里馬素、蝦子花素、綠原酸、沒食子酸。根狀莖或全草入藥，有小毒，能調經活血、消腫止痛，主治月經不調、骨折、關節扭傷。柳蘭繁殖采用種子繁殖，也可分株和扦插繁殖，懸浮細胞培養還無人研究，懸浮細胞具有操作簡單可控，生產成本低，繁殖率高等優點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供柳蘭懸浮細胞培養的快速繁殖方法，操作簡單可控，生產成本低，繁殖率高等優點。

為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案：

選用柳蘭的種子，在肥皂水中浸泡30min，自來水沖洗1h，在超凈工作臺上用0.2％的升汞消毒15min，無菌水沖洗5遍至無殘留溶液，經消毒處理后的外植體，去掉外種皮接種在1/2WPM+NAA0.1-0.2mg/L+6-BA0.5-1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，誘導愈傷組織的條件為暗光照，光照10h/d，溫度21℃，30天后，將誘導出來的愈傷組織接入培養基WPM+1-2mg/L6-BA+0.3-0.5mg/L2,4-D+150mg/L番茄汁培養基中進行繼代培養，繼代培養40天后，挑選嫩綠松散的愈傷組織，放入附加了150mg/L紅色紅曲酶的培養液體培養基中，加入已消毒滅菌后的玻璃珠震搖，置于震蕩培養箱中進行水平震蕩培養，振幅2-4cm，震動頻率90r/min，溫度23℃，光照2500lx，光期12h/d，7-8天繼代一次，取樣，洗滌，烘干。

采用本發明制備的柳蘭懸浮細胞，工藝流程簡單，生產周期短，不受地域，季節，氣候等自然環境因素影響等優點，有利于建立柳蘭懸浮細胞的大規模工廠化生產。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

選用柳蘭的種子，在肥皂水中浸泡30min，自來水沖洗1h，在超凈工作臺上用0.2％的升汞消毒15min，無菌水沖洗5遍至無殘留溶液，經消毒處理后的外植體，去掉外種皮接種在1/2WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，誘導愈傷組織的條件為暗光照，光照10h/d，溫度21℃，30天后，將誘導出來的愈傷組織接入培養基WPM+1mg/L6-BA+0.3mg/L2,4-D+150mg/L番茄汁培養基中進行繼代培養，繼代培養40天后，挑選嫩綠松散的愈傷組織，放入附加了150mg/L紅色紅曲酶的培養液體培養基中，加入已消毒滅菌后的玻璃珠震搖，置于震蕩培養箱中進行水平震蕩培養，振幅2-4cm，震動頻率90r/min，溫度23℃，光照2500lx，光期12h/d，7-8天繼代一次，取樣，洗滌，烘干，成活率為90%。

實施例2

選用柳蘭的種子，在肥皂水中浸泡30min，自來水沖洗1h，在超凈工作臺上用0.2％的升汞消毒15min，無菌水沖洗5遍至無殘留溶液，經消毒處理后的外植體，去掉外種皮接種在1/2WPM+NAA0.2mg/L+6-BA1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，誘導愈傷組織的條件為暗光照，光照10h/d，溫度21℃，30天后，將誘導出來的愈傷組織接入培養基WPM+2mg/L6-BA+0.5mg/L2,4-D+150mg/L番茄汁培養基中進行繼代培養，繼代培養40天后，挑選嫩綠松散的愈傷組織，放入附加了150mg/L紅色紅曲酶的培養液體培養基中，加入已消毒滅菌后的玻璃珠震搖，置于震蕩培養箱中進行水平震蕩培養，振幅2-4cm，震動頻率90r/min，溫度23℃，光照2500lx，光期12h/d，7-8天繼代一次，取樣，洗滌，烘干，成活率為91%。

實施例3

選用柳蘭的種子，在肥皂水中浸泡30min，自來水沖洗1h，在超凈工作臺上用0.2％的升汞消毒15min，無菌水沖洗5遍至無殘留溶液，經消毒處理后的外植體，去掉外種皮接種在1/2WPM+NAA0.2mg/L+6-BA1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，誘導愈傷組織的條件為暗光照，光照10h/d，溫度21℃，30天后，將誘導出來的愈傷組織接入培養基WPM+2mg/L6-BA+0.3mg/L2,4-D+150mg/L番茄汁培養基中進行繼代培養，繼代培養40天后，挑選嫩綠松散的愈傷組織，放入附加了150mg/L紅色紅曲酶的培養液體培養基中，加入已消毒滅菌后的玻璃珠震搖，置于震蕩培養箱中進行水平震蕩培養，振幅2-4cm，震動頻率90r/min，溫度23℃，光照2500lx，光期12h/d，7-8天繼代一次，取樣，洗滌，烘干，成活率為92%。