[發明專利]一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410462972.2
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104160963A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組培條件下紅花五味子懸浮細胞的培養，屬于植物技術領域。

背景技術

紅花五味子，Schisandra?rubriflora?(Franch.)?Rehd.?et?Wils.，藤本，木蘭科，生長于海拔1000-1300米的灌叢中，河谷針闊混交林中，林窗，林中，山谷闊葉林中，山坡灌叢，山坡林緣，山坡林中，山坡雜木林中，疏林中，產于甘肅南部、湖北、四川、云南西部及西南部、西藏東南部。果實治咳喘，自汗，盜汗，遺精，久瀉，神經衰弱；藤、莖治風濕性關節炎，目前沒有進行人工繁殖，主要進行野外采集，組培方法是對紅花五味子進行快速繁殖的有效的方法，有助于其大規模開發和利用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供紅花五味子細胞懸浮培養的快速繁殖方法，操作簡單，試驗重復性好，細胞繁殖率高等優點，可以規模化的為藥廠提供制藥原料。

為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案：

取紅花五味子的葉片，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理11min，無菌水沖洗5-7遍，取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織接入液體培養基LS+NOA0.2mg/L+ZT0.2mg/L+6mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx，懸浮培養出來的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。

采用本發明制備的紅花五味子懸浮細胞生長速度快，利于大生產操作，能耗小，污染小，操作可控。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

取紅花五味子的葉片，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理11min，無菌水沖洗5-7遍，取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織接入液體培養基LS+NOA0.1mg/L+ZT0.1mg/L+5mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx，懸浮培養出來的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。

實施例2

取紅花五味子的葉片，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理11min，無菌水沖洗5-7遍，取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織接入液體培養基LS+NOA0.2mg/L+ZT0.3mg/L+7mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx，懸浮培養出來的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。

實施例3

取紅花五味子的葉片，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理11min，無菌水沖洗5-7遍，取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織接入液體培養基LS+NOA0.2mg/L+ZT0.3mg/L+6mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx，懸浮培養出來的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。

實施例4

取紅花五味子的葉片，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理11min，無菌水沖洗5-7遍，取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織接入液體培養基LS+NOA0.2mg/L+ZT0.1mg/L+7mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx，懸浮培養出來的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。