[發明專利]一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法在審
| 申請號： | 201410462972.2 | 申請日： | 2014-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN104160963A | 公開（公告）日： | 2014-11-26 |
| 發明（設計）人： | 楊存 | 申請（專利權）人： | 南京通澤農業科技有限公司 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210046 江蘇省南京市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 紅花 五味子 懸浮 細胞 快速 繁殖 方法 | ||
1.?一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、無菌莖尖的破碎、懸浮細胞培養等，主要步驟如下：
（1）取紅花五味子的莖尖組織，按照常規的消毒方法對其進行滅菌處理；
（2）將步驟（1）滅菌處理過的紅花五味子莖尖經過破碎接入液體培養基LS+NOA0.1-0.2mg/L+ZT0.1-0.3mg/L+5-7mmol/LL-谷氨酰胺+碳酸鈣進行懸浮細胞培養，附加蔗糖20g/L，PH5.8-5.95，光照1000lx；
（3）取步驟（2）懸浮培養繼代多次后的紅花五味子細胞接種到無菌固體平板上篩選次生代謝物高產細胞株。
2.?按照權利要求1所述的一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述紅花五味子無菌莖尖的獲得為：取紅花五味子的莖尖，在洗衣粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上氯化汞處理7min，無菌水沖洗5-7遍。
3.?按照權利要求1所述的一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（2）中所述紅花五味子莖尖的破碎為取消毒處理過的紅花五味子的莖尖組織在滅菌過的玻璃勻漿器中研磨，使其軟組織破碎，然后將破碎組織進行液體懸浮培養。
4.?按照權利要求1所述的一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（2）所述的紅花五味子懸浮細胞按照下述方法得到：取破碎過的紅花五味子莖尖接種到盛有60mLLS液體培養基的三角瓶中，接種后置于旋轉式搖床振蕩培養，搖床轉速為95r/min，溫度28℃。
5.?按照權利要求1所述的一種紅花五味子懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（2）中所述的紅花五味子懸浮細胞培養中附加了5mmol/LL-谷氨酰胺和碳酸鈣，L-谷氨酰胺可以促進次生代謝物質的合成，碳酸鈣作為固體緩沖物質用來調控PH值的穩定。
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