[發(fā)明專利]基于金黃色葡萄球菌的生物探針、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410462482.2
• 申請(qǐng)日: 2014-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104198737A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 危宏平;胡偉;楊航;余軍平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開(kāi)磊

1.一種基于金黃色葡萄球菌的生物探針，其特征在于，包括：

金葡菌載體以及標(biāo)記在所述金葡菌載體的表面A蛋白上，且能夠與被檢測(cè)抗原特異性結(jié)合的抗體；

其中，所述金葡菌載體被四唑氯化物染料染至紅色。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物探針，其特征在于，所述四唑氯化物染料具體為5-氰基-2，3-二(4-甲基苯基)四唑氯化物。

3.一種根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)、利用LB平板劃線分離出金葡菌，再利用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得到OD600為0.5-1.5的金葡菌懸液；

2)、在所述金葡菌懸液中加入四唑氯化物染料，并使得所述四唑氯化物染料的終濃度達(dá)到1-10mM，染色10-30min，得到紅色菌懸液；

3)、將所述紅色菌懸液依次進(jìn)行離心收集菌體、緩沖液清洗、重懸以及滅活，得到紅色的金葡菌載體懸液；

4)、將紅色的所述金葡菌載體懸液與能夠和被檢測(cè)的抗原特異性結(jié)合的抗體混合后依次進(jìn)行孵育、離心收集沉淀、緩沖液清洗以及重懸，得到標(biāo)記有抗體的菌懸液；

5)、將所述標(biāo)記有抗體的菌懸液中加入封閉劑后顛倒混勻，進(jìn)行封閉處理，得到紅色的生物探針。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟4)中，所述抗體包括單克隆抗體或多克隆抗體；

在步驟5)中，所述封閉劑包括脫脂奶粉或牛血清蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟1)中：所述擴(kuò)大培養(yǎng)的溫度為35-39℃，轉(zhuǎn)速為160-200rpm。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟3)中：

所述離心的轉(zhuǎn)速為3800-4200rpm，時(shí)間為3-7min；

所述清洗以及重懸均采用濃度為0.1M、pH為8.0的Tris-HCl，且所述清洗的次數(shù)為2-3次。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟3)中：

所述滅活具體包括：在將所述重懸處理后的紅色菌懸液中加入終濃度為1％的甲醛處理10-30min；

或，將所述重懸處理后的紅色菌懸液在60-75℃溫育15-50min。

8.根據(jù)權(quán)利要求3-7任一項(xiàng)所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟4)中：

能夠和被檢測(cè)的抗原特異性結(jié)合所述抗體的濃度為0.1-5mg/ml，且所述金葡菌載體懸液與所述抗體的體積比為1:50-500；

所述孵育的溫度為37℃，時(shí)間為30min，轉(zhuǎn)速為180rpm；

所述離心收集沉淀中，離心的溫度為4℃，轉(zhuǎn)速為4000rpm，時(shí)間為5min；

所述清洗以及重懸均采用濃度為0.1M，pH為8.0的Tris-HCl。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的生物探針的制備方法，其特征在于，在步驟5)中：

每100毫升的所述標(biāo)記有抗體的菌懸液加入的封閉劑的質(zhì)量為0.1-5克。

10.權(quán)利要求3-7任一項(xiàng)所述制備方法獲得的生物探針在腸出血性大腸桿菌O157:H7檢測(cè)中的應(yīng)用。