[發明專利]一種基于酸中心復合物的免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201410457671.0
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104297478A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 任祥;杜斌;閆濤;魏琴;馬洪敏;吳丹
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532;G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于酸中心復合物的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將直徑為4?mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；將6?μL、0.5?~?2?mg/mL?酸中心復合物FA@PANI@CS-HCl分散液滴加到電極表面，室溫下晾干成膜；?

（2）依次滴加6?μL的EDC/NHS溶液、6?μL的Ab-Ag@Co₃O₄抗體孵化物溶液于電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1?mol/L?的EDC和0.1?mol/L?的NHS按照1?~?4?:?1的體積比混合制得；

（3）滴加6?μL、質量分數為0.5%?~?2%的BSA溶液于電極表面，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（4）滴加6?μL、0.0001~2?ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標志物抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干，制得一種基于酸中心復合物的免疫傳感器。

2.如權利要求1所述的一種基于酸中心復合物的免疫傳感器的制備方法，所述的酸中心復合物FA@PANI@CS-HCl分散液，其特征在于，制備步驟如下：

將0.4~2.0?mg的二茂鐵甲酸FA與0.4~2.0?mg的鹽酸摻雜的聚苯胺PANI混合，分散于1?mL、0.5~10?mg/mL的殼聚糖鹽酸鹽CS-HCl水溶液中，震蕩超聲24?h，混合均勻。

3.如權利要求1所述的一種基于酸中心復合物的免疫傳感器的制備方法，所述Ab-Ag@Co₃O₄抗體孵化物溶液，其特征在于，制備步驟如下：

（1）Co₃O₄納米片的制備

在磁力攪拌下，將2.0~3.0?g的CoCl₂·6H₂O溶于50~70?mL?超純水中，制得CoCl₂水溶液；將20?mL、0.1~1.0?mol/L?NaOH水溶液逐滴加入到CoCl₂水溶液中，繼續攪拌5?min，得到棕色沉淀，離心，用超純水和無水乙醇分別洗滌3次，在60?℃真空干燥箱中干燥12?h，制得固體沉淀物，將其在300~500℃下煅燒1?h，逐漸降到室溫，制得Co₃O₄納米片；

（2）氨基化Co₃O₄的制備

將0.1?g?的Co₃O₄納米片加入到10?mL的無水甲苯中，加入0.1~1?mL?的3-氨丙基三乙氧基硅烷，60~80℃回流1.5?h，離心，于110℃下干燥1?h，制得氨基化的Co₃O₄；

（3）Ab-Ag@Co₃O₄抗體孵化物溶液的制備

將50?mg的硝酸銀溶于50?mL、質量分數為3~8?%的檸檬酸鈉水溶液中，攪拌1?h；逐滴加入1~5?mL、0.1?mmoL/L的硼氫化鈉水溶液，攪拌20~30?min，直至變為棕黃色，制得Ag納米粒子溶液；將1?mg氨基化的Co₃O₄和30~70?mL的Ag納米粒子溶液，充分混合，震蕩離心，得到Ag@Co₃O₄；將1?mg的Ag@Co₃O₄加入到1?mL、0.1~5?μg/mL的抗體Ab溶液中，充分混勻，震蕩24?h，制得Ab-Ag@Co₃O₄抗體孵化物溶液。