[發(fā)明專利]一種檢測融合基因AML1-ETO mRNA表達的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410455526.9
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104195255A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐偉杰
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州藍吉生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種檢測融合基因AML1-ETO?mRNA表達的試劑盒，其特征在于包括：(a)RNA 提取試劑、AML1-ETO反應液、ABL反應液、一步法PCR酶系、AML1-ETO陽性定量 參考品1-5、ABL陽性定量參考品1-4和DEPC水；(b)分隔并集中包裝上述試劑的試劑 管的包裝盒；

所述的RNA提取試劑包括5×的紅細胞裂解液、RNA提取液-Trizol試劑、氯仿、異 丙醇和DEPC乙醇；

所述的AML1-ETO反應液包括正向引物、反向引物、AML1-ETO的寡核苷酸探針、 PCR反應緩沖液，其中AML1-ETO反應液中正向和反向引物分別是：

5’-GGATGGGCCCCGAGAAC-3’(SEQ?ID?NO:1)；

5’-GTCAGCCTAGATTGCGTCTTCA-3’(SEQ?ID?NO:2)；

AML1-ETO的寡核苷酸探針是：5’-X-TCGAAATCGTACTGAGAAGCACTCCA-Y-3’ (SEQ?ID?NO:3)，其中X表示的是熒光報告基團，Y表示的是熒光淬滅基團；

所述的ABL反應液包括正向引物、反向引物、ABL的寡核苷酸探針、PCR反應緩沖 液，其中ABL反應液中正向和反向引物分別是：

5’-GACGTCTGGGCATTTGGAGTA-3’(SEQ?ID?NO:4)

5’-TCATACACCTGGGACAGGTCAA-3’(SEQ?ID?NO:5)

ABL的寡核苷酸探針是:5’-X-ATGGCATGTCCCCTTACCCGGGA-Y-3’(SEQ?ID? NO:6)，其中X表示的是熒光報告基團，Y表示的是熒光淬滅基團；

所述的AML1-ETO陽性定量參考品1-5為均含有濃度為1×10³拷貝/5μL～1×10⁷拷 貝/5μL的AML1-ETO目的片段的重組質(zhì)粒；所述的ABL陽性定量參考品1-4為均含有 濃度為1×10³拷貝/5μL～1×10⁶拷貝/5μL的ABL目的片段的重組質(zhì)粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的AML1-ETO反應液和ABL 反應液中的PCR緩沖液包含10mmol/L的Tris-HCl緩沖液、50mmol/L的KCl溶液和 3.0mmol/L的MgCl₂溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述一步法PCR酶系包括逆轉(zhuǎn)錄酶、 熱啟動Taq酶、RNA酶抑制劑、dNTPs以及酶稀釋液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的AML1-ETO反應液中引物和 探針所用的濃度均為2～10pmol/人份。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的ABL反應液中引物和探針所 用的濃度均為2～10pmol/人份。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的待檢樣本是外周血或 骨髓。