[發明專利]一種豆渣蛋白質的提取方法及其用于制備DPP?IV抑制肽的方法

有效

• 申請號: 201410455009.1
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104256047B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 謝寧寧;黃晶晶;程江華;王灼琛;余麗;王曉莉;王苗苗;李迪龍;趙友成;殷俊峰;閆曉明
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: A23J1/14
• 分類號: A23J1/14;C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于保健食品領域，具體涉及一種豆渣蛋白質的提取方法及其用于制備DPP-IV抑制肽的方法。

背景技術

在豆腐、豆漿和大豆分離蛋白(SPI)的加工中，有大量的副產物豆渣產生，而且豆渣含有15％～20％的蛋白質。國內每年用于加工豆腐或豆奶的大豆約400萬噸，用于加工大豆分離蛋白的大豆約為300萬噸，產生的豆渣數量是非常龐大的。豆渣是一種纖維狀殘渣，長期以來，由于新鮮豆渣含水量高(可達75-78％)，容易腐敗變質，通常作為廢棄物直接丟棄，極少用來食用，只有部分被用作詞料或肥料。因此，豆渣利用率低，其潛在營養價值未得到充分的開發利用，甚為可惜。然而，隨著人們對食品營養需求的提升，對豆渣的研究也越來越深入。

目前，豆渣中蛋白質的提取方法通常主要是堿溶酸沉法。堿溶酸沉提取工藝是利用弱堿性水溶液浸泡低變性脫脂豆粕，使豆粕中可溶性蛋白質溶于弱堿性水溶液中，然后采用鹽酸溶液滴加進入已溶解蛋白質的弱酸溶液中，調節其pH值到大豆蛋白的等電點(pH＝4.2-4.6)，使大豆蛋白質沉淀下來，最后通過過濾、溶解、中和、滅菌和噴霧干燥，得到粉末狀大豆分離蛋白產品。采用堿溶酸沉法時，常規使用的酸液和堿液分別為HCl和NaOH，這兩種試劑容易造成環境的污染。

2型糖尿病發病和進展的一個重要原因是胰島功能的進行性衰退，包括β細胞胰島素分泌缺陷和α細胞胰升糖素不適當的分泌增加造成的胰島素與胰升糖素比例失調。胰升糖素樣肽1(GLP-1)是一種在食物營養物質刺激下，由腸道內分泌細胞合成分泌的腸促胰素(Incretin)，具有葡萄糖依賴性促胰島素分泌的特性，可通過促進β細胞的胰島素分泌、抑制α細胞不適當的胰升糖素分泌、延緩胃排空及抑制食欲等多個途徑參與機體血糖穩態調節。同時，GLP-1還可促進β細胞增殖、抑制β細胞凋亡，增加胰島素合成、改善β細胞功能。

但內源性活性GLP-1半壽期極短，迅速被二肽基肽酶(DPP-IV)裂解而失活，不能達到2型糖尿病治療濃度。DPP-IV抑制劑，可以選擇性抑制DPP-IV活性，阻止內源性活性GLP-1裂解，延長其半衰期，提高其血漿水平和效能。

DPP-IV抑制劑通常為酮類化合物和哌嗪類化合物，均具有不同程度的毒副作用。此外，中國專利CN101029081中，公布了重組蛋白Exendin-4多肽具有DPP-IV抑制特性，該多肽通常采用化學合成法和基因工程菌發酵法來生產，工序繁瑣，價格也比較昂貴，且產品穩定性也較差。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種豆渣蛋白質的簡易的提取方法及其用于制備DPP-IV抑制肽的方法。

為了實現上述目的，本發明提供：

一種豆渣蛋白質的提取方法，按如下步驟進行：

(1)將新鮮的豆渣按照料液比為1∶10～1∶100加入水，攪拌均勻；

(2)將豆渣液放置于30-50℃溫度條件下，放置時間1.0～24h，在此過程中豆渣液的pH值不斷降低，待pH值為3.0-5.0時，將豆渣液取出，室溫下冷卻降溫，此時豆渣液分成三層，最上層為淺黃色漂浮物，中間層為水，最下層為析出的淺黃色蛋白質，采用玻璃容器將最上層的黃色漂浮物棄去；

(3)采用2-12層120目以上紗布過濾，除去水，收集紗布上殘留的豆渣蛋白質，將豆渣蛋白質放置于室溫自然晾干。

采用上述的豆渣蛋白質制備DPP-IV抑制肽的方法，按如下步驟進行：

(1)按料液比為1∶20～1∶200向豆渣蛋白質中加入水，調節pH值至1.5～10.0；

(2)按蛋白酶與加水之前的豆渣蛋白質比為1∶200～1∶20再加入蛋白酶，調節溫度至20～60℃，進行水解反應0.5～6h，水解反應結束后，滅酶得到水解液；

(3)將水解液離心去除殘渣，獲得的上清液經干燥制得DPP-IV抑制肽粗品粉末；

(4)將DPP-IV抑制肽粗品粉末配成濃度為20-200mg/ml的溶液，然后經過膜分離或柱層析進行進一步的純化得到DPP-IV抑制肽純品。

所述的步驟(2)中所述的蛋白酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、復合風味蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶中的一種或多種的復配。

所述的步驟(3)中干燥方式為冷凍干燥、真空干燥或噴霧干燥。