[發明專利]一種制備葡萄糖氧化酶的方法

無效

• 申請號: 201410452283.3
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN104164411A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 楊洋;趙芬芬;葉琴;胡振興;馬萬良
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12R1/80
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王正茂

1.一種制備葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以橘青霉(Penicillium?citrinum?Thom.)為出發菌株，用無菌水進行洗脫，稀釋得到橘青霉孢子懸液；

(2)挑取步驟(1)獲得的橘青霉孢子懸液接種于斜面培養基，置于恒溫箱中放大培養，培養條件為：28～32℃，2～5天；

(3)將步驟(2)培養得到菌種用無菌水進行洗脫，得到孢子懸浮液；

(4)挑取步驟(3)獲得孢子懸浮液接種于固體發酵培養基，接種量為10％～20％(v/v)，將固體發酵培養基置于搖床中震蕩培養，可得到葡萄糖氧化酶發酵液。

(5)將發酵液進行離心、超濾濃縮除鹽，得到葡萄糖氧化酶粗酶液；

(6)將步驟(5)所得粗酶液經甲醇、丙酮相結合二次沉淀，過濾，濾餅凍干，即得到葡萄糖氧化酶制品。

2.根據權利要求1所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述斜面培養基成分為：蔗糖30g/L，硝酸鈉3g/L，七水合硫酸鎂0.5g/L，氯化鉀0.5g/L，四水合硫酸亞鐵0.01g/L，磷酸氫二鉀1g/L，瓊脂15g/L，余量為蒸餾水，PH6.5。

3.根據權利要求1所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述固體發酵培養基成分為：甘蔗渣5～10g/L，酵母粉2～4g/L,硫酸鎂0.3～1g/L，磷酸二氫鈉2～4g/L,氯化鉀0.2～0.5g/L，碳酸鈣25～35g/L。

4.根據權利要求3所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述固體發酵培養基成分為：甘蔗渣5g/L，酵母粉2g/L,硫酸鎂0.5g/L，磷酸二氫鈉2g/L,氯化鉀0.3g/L，碳酸鈣30g/L。

5.根據權利要求3所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述固體發酵培養基成分為：甘蔗渣10g/L，酵母粉2g/L,硫酸鎂0.8g/L，磷酸二氫鈉2g/L,氯化鉀0.2g/L，碳酸鈣30g/L。

6.根據權利要求1所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)搖床工作參數為溫度在28～35℃，轉速在180～220rpm。

7.根據權利要求7所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)搖床工作參數為溫度在28℃，轉速在200rpm。

8.根據權利要求1所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(3)搖床震蕩時間為2～5天。

9.根據權利要求8所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(4)搖床震蕩時間為3天。

10.根據權利要求1所述的制備葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，步驟(5)離心的工作參數為8000rpm，20min。