[發明專利]一種海洋微生物來源的萘醌類化合物、制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201410451707.4
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN104262130A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 王偉毅;李增鵬;陳建明;馮世秀;蘇洋
• 申請（專利權）人: 大豐海洋生物醫藥研究所;王偉毅;李增鵬;馮世秀
• 主分類號: C07C50/34
• 分類號: C07C50/34;C12P7/66;A61P35/00;C12R1/80
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 陳芳

技術領域

本發明涉及化合物領域，尤其涉及一種海洋微生物來源的萘醌類化合物、制備方法及其用途。

背景技術

長期以來，惡性腫瘤一直嚴重威脅著人類的健康和生命。據世界衛生組織統計，全世界每年約有600萬人被癌癥奪去生命，估計到2020年將升至1000萬人。但是，目前仍然沒有很好的藥物可以用于臨床來消除癌癥。很多抗腫瘤藥物在臨床使用的過程中，逐漸發現它們的選擇性低，在抑制腫瘤增長的同時對正常細胞也有很大的殺傷力，導致很強的毒副作用。弱的表現為嘔吐、乏力、厭食、頭暈，嚴重的則發現對心臟有損傷。因此，尋求結構新穎且毒副作用小的新型抗腫瘤藥物迫在眉睫。

海洋微生物具有極為豐富的生物多樣性及功能多樣性，由于其特殊的生存環境，在適應環境的進化過程中形成了獨特的遺傳代謝機制和化學防御機制，是目前新結構或新活性天然產物的主要來源。海洋抗癌藥物研究在海洋藥物研究中一直起著主導作用，現已發現海洋生物提取物中至少有10％具有抗腫瘤活性。美國每年有1500個海洋產物被分離出來，1％具有抗癌活性，目前至少已有10個以上海洋抗癌藥物進入臨床或臨床前研究階段。近年來，加強海洋微生物的活性篩選，尋找高效低毒的抗癌藥物，直接用于臨床或作為先導化合物進行結構修飾，已經成為海洋抗癌藥物研究的發展趨勢。另外，海洋微生物容易采集和培養，具有可規模化獲取、環境友好、應用成本低等特點，其開發應用前景已獲得國際共識。

萘醌類化合物是一類廣泛存在于自然界中的小分子化合物，具有多種生物活性。許多化合物顯示出獨特的抗腫瘤作用，如紫草素、胡桃醌、蘭雪醌、維生素K3、沙爾威辛(salvicine)等。人們合成大量的萘醌衍生物，發現了一些有開發前途的抗腫瘤藥，有的已經進入臨床研究階段。但是此類藥物仍然存在較大的毒副作用，如骨髓抑制性、心臟毒性問題，大大限制了其劑量提高和臨床治療效果。因此，有必要尋找更好的結構新穎的同類化療替代藥物。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的具有抗腫瘤作用的化合物。

為實現上述目的，本發明提供一種萘醌類化合物CWL-168，其特征在于，系統命名為1,2,3,4-四氫-1,2,5-三羥基-6,7-二甲氧基-3-甲基-9,10-蒽酮，結構如下式所示，

所述的萘醌類化合物CWL-168的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

菌種的準備：使用海水PDA培養基，高溫滅菌，制成平板，置于常溫狀態下，接種產黃青霉Penicillium?chrysogenum菌絲體培養，作為菌種；所述海水PDA培養基成分為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15-20g，1L海水；

發酵種子液制備：在多個錐形瓶中分別裝入海水PDA液體培養基，高溫滅菌后，接種上述菌種培養，將該培養物作為種子液；

接種：采用固體發酵方式，準備發酵瓶，加入大米固體發酵培養基，高溫滅菌，接種上述種子液，培養；所述大米固體發酵培養基為每1L的三角錐瓶裝大米105g，小黃米45g；

萃取：待真菌發酵成熟后，加入乙醇溶液500mL/瓶浸泡發酵產物，發酵產物溶入乙醇溶液中，浸泡后，將上層乙醇溶液倒出，下層為固體發酵產物；加入新的乙醇溶液500mL/瓶，此步驟反復3次，每次浸泡常溫過夜，如此制備得到乙醇初提液；以乙醇溶液為溶劑，采用高壓乳化切割機分散提取下層的固體發酵產物，得到胞內提取物，然后與所得的乙醇初提液合并，用旋轉蒸發儀濃縮至固態，即得到初級浸膏；

分離：將所得初級浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，再將萃取液濃縮后，經硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑，從體積比95:5-10:90進行梯度洗脫，其中梯度洗脫下來的組分在薄層層析中能用氯仿-丙酮-冰醋酸體積比為30:10:1溶液系統展開，再經Sephadex?LH-20柱子純化，用氯仿-丙酮體積比為5:2的溶液體系洗脫，洗脫液以15ml為一管，收集20管，挑取其中第9-12管合并，并濃縮至干后得到黃色粉末狀化合物CWL-168。

所述萃取中的乙醇溶液為體積分數為70％的乙醇水溶液。

所述菌種的準備中，培養條件為28℃下靜置培養4-5天。

所述發酵種子液制備步驟中培養條件為28℃下以180rpm/min振蕩培養2-3天。

所述接種步驟中培養條件為28℃培養箱放置28天。