[發明專利]一種30分鐘內提取土壤微生物基因組DNA的試劑盒

在審

• 申請號: 201410449878.3
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN104178481A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 王清水;余彥
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘

1.一種三十分鐘內快速提取土壤微生物基因組DNA的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括：

（1）Buffer?A溶液的配置：pH=5-6、0.5-2M?Tris-HCl?；

（2）Buffer?B溶液的配置：0.1-0.3M?Al₂(SO₄)_3?；

（3）Buffer?C溶液的配置：3-5M?NaOH；

（4）Buffer?D溶液的配置：pH=7-9、0.1-0.2M?Tris-HCl；

（5）Buffer?E溶液的配置：300-350μl、10wt.%SDS；

（6）Buffer?F溶液的配置：稱取2-3g?LiCl，1-2g?Tris，3-4g?EDTA，加入雙蒸水溶解并調節至pH=7.5-8.5，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：4-6M鹽酸胍，15-25?mM?Tris-HCl，pH6.5-7.0，使用前加入乙醇，乙醇濃度為35-40wt.％；

（8）漂洗液溶液配制：15-25mM?NaCl，1-3mM?Tris-HCl，pH7.0-8.0；

（9）洗脫液溶液配制：5-15mM?Tris-HCl，pH8.0-9.0。

2.根據權利要求1所述的一種三十分鐘內快速提取土壤微生物基因組DNA的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括如下：

（1）Buffer?A溶液的配置：pH=5.5、1M?Tris-HCl?；

（2）Buffer?B溶液的配置：0.2M?Al₂(SO₄)_3?；

（3）Buffer?C溶液的配置：4M?NaOH；

（4）Buffer?D溶液的配置：pH=8、0.1M?Tris-?Tris-HCl；

（5）Buffer?E溶液的配置：325μl、10%SDS；

（6）Buffer?F溶液的配置：稱取2.416g?LiCl，1.211g?Tris，3.506g?EDTA，加入雙蒸水溶解并調節至pH=8.0，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：5M鹽酸胍，20?mM?Tris-HCl，pH6.6，使用前加入乙醇，乙醇濃度為38wt.％；

（8）漂洗液溶液配制：20mM?NaCl，2mM?Tris-HCl，pH7.5；

（9）洗脫液溶液配制：10mM?Tris-HCl，pH?8.5。

3.一種如權利要求1或2所述的試劑盒提取土壤微生物基因組DNA的方法，其特征在于：所述方法包括土壤樣品的前處理，土壤微生物基因組DNA的提取和純化。

4.根據權利要求3所述的試劑盒提取土壤微生物基因組DNA的方法，其特征在于：具體步驟為：

（1）土壤樣品的前處理：用天平稱取0.5g的土壤于2ml的離心管中，加入100μl?Buffer?A，600μl無菌水，300μl?Buffer?B，渦旋震蕩30s；加入100μl?Buffer?C，300μl?Buffer?D，渦旋震蕩30s；8000g?離心2min，去上清；

（2）土壤微生物基因組DNA的提取和純化：加入325μl?Buffer?D，0.5g?0.5mm玻璃珠，325μl?Buffer?E，325μl?Buffer?F，渦旋震蕩1min，4℃?11000g?離心2min，吸取750ul上清至1.5ml離心管，加入750μl酚：氯仿：異戊醇=25:24:1，渦旋震蕩30s，4℃?16000g?離心1min，將上清轉移至1.5ml離心管，加入等體積的沉淀劑，將樣品加到硅基質膜核酸純化柱上，12000?g?離心30s，棄廢液，加入500μl去蛋白液，12000?g?離心30s，加入500μl漂洗液，12000?g?離心30s，吹干，加入50μl?洗脫液，于1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測。