[發(fā)明專利]朝鮮薊試管實(shí)生苗莖尖快繁育苗的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410449833.6
• 申請(qǐng)日: 2014-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN104145825A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李進(jìn)進(jìn);廖俊杰;張建軍;曾佑煒;高陽林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞市睿紳生物技術(shù)有限公司;廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種朝鮮薊試管實(shí)生苗莖尖快繁育苗的方法。

背景技術(shù)

朝鮮薊，別名菊薊、菜薊，學(xué)名Cynara?scolymus?L.，為菊科(Comopsite)菜薊屬多年生草本植物。并且是一種藥食同源植物，既是一種很好的菜肴，同時(shí)有很好的藥用價(jià)值，其花蕾或葉含菜薊素、菜薊苦素、大海米菊素、木犀草甙等成分，在歐洲的德國、法國、英國、意大利等國家，朝鮮薊用于防治消化不良、便秘、腹瀉、肝臟和膽囊疾病以及高血脂、動(dòng)脈硬化、高血糖、黃膽等；在巴西，朝鮮薊用于糖尿病、高血壓的預(yù)防。同時(shí)，朝鮮薊最突出的特點(diǎn)是同時(shí)具備保護(hù)和恢復(fù)肝臟細(xì)胞的功能，也是其它降脂降糖產(chǎn)品所無法替代的。在我國，朝鮮薊主要加工成罐頭成品出口，目前世界上朝鮮薊罐頭年需求量約10萬噸以上。近年來，美國及西歐等發(fā)達(dá)國家對(duì)朝鮮薊的消費(fèi)和進(jìn)口量不斷增加，罐頭制品在國際市場供不應(yīng)求(李進(jìn)進(jìn).朝鮮薊繼代增殖快繁方法探討[J].種子，2011(1))。

目前朝鮮薊的種植方法多采用種子播種，露天栽種，而朝鮮薊是異化授粉植物，在我國大多數(shù)地區(qū)只開花不結(jié)果，種子繁育率低，雖然種子昂貴但我國幾個(gè)主要種植地區(qū)(如湖南常德)每年都需要大量進(jìn)口種子，這不僅成本高，而且經(jīng)常因茬口接不上而延誤農(nóng)時(shí)；另一種是通過組培快繁技術(shù)，但外植體是采用露地健壯植株的分蘗苗莖尖消毒后進(jìn)行誘導(dǎo)培育朝鮮薊種苗，其缺點(diǎn)和不足是朝鮮薊表面密布絨毛，消毒效果不理想，而且幼嫩莖尖常因消毒劑的副作用導(dǎo)致褐化或死忙，影響成苗率(張平喜，朝鮮薊的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究[J].中國園藝文摘，2011.6)。為改善傳統(tǒng)的育種方法，適應(yīng)國際市場的需要，迫切需要改善朝鮮薊的組培快繁途徑。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種朝鮮薊試管實(shí)生苗莖尖快繁育苗的方法。利用種子消毒后進(jìn)行試管內(nèi)播種，獲得大量無菌實(shí)生苗；并采取合適大小的試管實(shí)生苗莖尖進(jìn)行從芽誘導(dǎo)獲得繼代無根苗；將無根苗進(jìn)行生根培育獲得朝鮮薊優(yōu)質(zhì)種苗，從而達(dá)到快速繁殖朝鮮薊種苗的目的。

因種子消毒比露地實(shí)生苗莖尖消毒容易而且成活率高，進(jìn)行試管播種成苗后無需再消毒，成功率可達(dá)90％以上，無疑達(dá)到快繁種苗并降低成本的目的。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種朝鮮薊試管實(shí)生苗莖尖快繁育苗的方法，包括如下步驟：

(1)將朝鮮薊(Cynara?scolymus?L.)種子進(jìn)行物理處理后，再經(jīng)消毒劑消毒后在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行試管內(nèi)播種、培育，將培育發(fā)芽的種子挑出至新鮮的種子培養(yǎng)基中進(jìn)行自然光照，獲得無菌實(shí)生苗；

(2)在無菌條件中進(jìn)行如下操作，將步驟(1)獲得的無菌實(shí)生苗切取0.7～1.0mm的實(shí)生苗莖尖轉(zhuǎn)入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)，再轉(zhuǎn)入自然光照下進(jìn)行培養(yǎng)，獲得叢芽，然后將叢芽轉(zhuǎn)至繼代培養(yǎng)基中，經(jīng)繼代培養(yǎng)后獲得無根苗；

(3)將步驟(2)獲得的無根苗轉(zhuǎn)至試管生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行試管生根培育獲得朝鮮薊優(yōu)質(zhì)種苗。

步驟(1)中所述的物理處理的條件優(yōu)選為黑暗條件下30～35℃溫水中恒溫浸泡12～24h；更優(yōu)選為黑暗條件下30℃溫水中恒溫浸泡24h；

步驟(1)中所述的消毒劑的組成及消毒條件優(yōu)選為75％(v/v)酒精15s+2％(v/v)NaClO(10～15)min+1g/L?HgCl₂(10～15)min；更優(yōu)選為75％(v/v)酒精15s+2％(v/v)NaClO(10～15)min+1g/L?HgCl₂15min；適當(dāng)提高1g/LHgCl₂的消毒時(shí)間，污染率會(huì)隨著降低。

步驟(1)中的物理處理后的種子用紗布松散包扎，消毒劑處理后用無菌水浸洗4～5次；

步驟(1)中所述的種子培養(yǎng)基的組成優(yōu)選為MS培養(yǎng)基+GA₃(0～3.0)mg/L+NAA(0～0.2)mg/L+活性炭(0～2)g/L+卡拉膠(6.8～7)g/L+蔗糖30g/L，pH5.5～5.7，其中，NAA為零時(shí)，GA₃和活性炭均不為零；更優(yōu)選為MS培養(yǎng)基+GA₃1.0mg/L+活性炭2g/L+卡拉膠7g/L+蔗糖30g/L，pH5.6；所述的GA₃，指赤霉素；所述的NAA，指a-萘乙酸；

步驟(1)中所述的培育的條件優(yōu)選為黑暗條件下，環(huán)境溫度23～28℃培育15～25天，培養(yǎng)濕度為70％～85％；