[發(fā)明專利]一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410449790.1
• 申請(qǐng)日: 2014-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN104170739A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張金芳;楊存
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京標(biāo)科生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組培條件下黃瑞木懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，屬于植物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黃瑞木，Adinandra?millettii?（Hook.?et?Arn.）?Benth.?et?Hook.?f.，山茶科，又名烏珠子、楊桐、雞仔茶、黃板叉木，落葉灌木，性極耐寒、耐旱、耐修剪，喜光，喜較深厚濕潤(rùn)但肥沃疏松的土壤。產(chǎn)于我國(guó)東北、華北、西北、華東等地,?定州酒莊苗圃有引種。涼血止血，消腫解毒。根：用于鼻衄睪丸炎，腮腺炎。鮮葉：外用治癤腫，毒蛇咬傷，毒蜂螫傷。目前主要的繁殖方法是扦插和壓條法繁殖。扦插可選一年生枝，秋冬沙藏后于翌年3月～4月扦插。性極耐寒、耐旱、耐修剪，喜光，喜較深厚濕潤(rùn)但肥沃疏松的土壤，壓條可在5月將枝條環(huán)割后埋入土中，生根后在翌春與母株割離分栽，使用組培方法對(duì)黃瑞木進(jìn)行快速繁殖尚無研究，利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法可以快速獲得大量黃瑞木細(xì)胞，縮短培養(yǎng)周期，短期內(nèi)提供大量的制藥原料。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供黃瑞木細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的快速繁殖方法，獲得生長(zhǎng)良好，生長(zhǎng)速度快的懸浮細(xì)胞，可以短期內(nèi)大規(guī)模的提供制藥原料。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案：

取黃瑞木的葉片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗為2min，超凈工作臺(tái)上氯化汞處理8min，無菌水沖洗4-6遍，消毒處理過的黃瑞木葉片接入培養(yǎng)基配方為MS+2，4-D0.5mg/L+IBA3mg/l+4mg/LABA誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入培養(yǎng)基ER+2，4，5-T0.2mg/L+KT0.2mg/L+VC100mg/L進(jìn)行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，?PH5.8，光照4000lx，增殖后的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基ER+IAA?0.2mg/L+6-BA0.2mg/L+椰乳15%進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，?PH5.8，光照4000lx，搖床轉(zhuǎn)速為90r/min，溫度26℃，光照12h。

采用本發(fā)明制備的黃瑞木懸浮細(xì)胞，生長(zhǎng)速度快，增殖率高，利于大生產(chǎn)操作，能耗小，污染小。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

取黃瑞木的葉片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗為2min，超凈工作臺(tái)上氯化汞處理8min，無菌水沖洗4-6遍，消毒處理過的黃瑞木葉片接入培養(yǎng)基配方為MS+2，4-D?0.5mg/L+IBA3mg/l+4mg/LABA誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入培養(yǎng)基ER+2，4，5-T0.1mg/L+KT0.1mg/L+VC100mg/L進(jìn)行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，?PH5.8，光照4000lx，增殖后的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基ER+IAA?0.1mg/L+6-BA0.1mg/L+椰乳15%進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，?PH5.8，光照4000lx，搖床轉(zhuǎn)速為90?r/min，溫度26℃。

實(shí)施例2

取黃瑞木的葉片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗為2min，超凈工作臺(tái)上氯化汞處理8min，無菌水沖洗4-6遍，消毒處理過的黃瑞木葉片接入培養(yǎng)基配方為MS+2，4-D0.5mg/L+IBA3mg/l+4mg/LABA誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入培養(yǎng)基ER+2，4，5-T0.2mg/L+KT0.3mg/L+VC100mg/L進(jìn)行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，?PH5.8，光照4000lx，增殖后的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基ER+?IAA?0.2mg/L+6-BA0.3mg/L+椰乳15%進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，?PH5.8，光照4000lx，搖床轉(zhuǎn)速為90?r/min，溫度26℃。

實(shí)施例3