[發明專利]一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410449790.1
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104170739A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 張金芳;楊存
• 申請（專利權）人: 南京標科生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.?一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的增殖、懸浮細胞培養等，主要步驟如下：

（1）取黃瑞木幼嫩莖段和葉片，按照常規的消毒方法對其進行滅菌處理；

（2）將步驟（1）消毒處理過的黃瑞木葉片接入培養基配方為MS+2，4-D?0.5mg/L+IBA3mg/l+4mg/LABA誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養；

（3）取步驟（2）誘導出來的愈傷組織放入培養基ER+2，4，5-T0.1-0.2mg/L+KT0.1-0.3mg/L+VC100mg/L進行愈傷組織增殖培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，?PH5.8，光照4000lx；

（4）取步驟（3）增殖后的愈傷組織放入液體培養基ER+IAA?0.1-0.2mg/L+6-BA0.1-0.3mg/L+椰乳15%進行懸浮細胞培養，附加蔗糖30g/L，?PH5.8，光照4000lx。

2.?按照權利要求1所述的一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述黃瑞木無菌葉片的獲得為，取黃瑞木的葉片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗為20min，超凈工作臺上氯化汞處理8min，無菌水沖洗4-6遍。

3.?按照權利要求1所述的一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（2）中所述愈傷組織的誘導采用的是暗室培養，并在培養基中附加ABA，可以促進愈傷組織的誘導和發生。

4.?按照權利要求1所述的一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（3）中所述愈傷組織的增殖中附加了VC，可以有效防止愈傷組織的褐化現象，且VC的加入方法為過濾滅菌。

5.?按照權利要求1所述的一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（4）所述的黃瑞木懸浮細胞按照按照下述方法得到：取誘導出來的嫩綠松散的愈傷組織，接種到盛有30mLER液體培養基三角瓶中，接種后置于旋轉式搖床振蕩培養，搖床轉速為90?r/min，溫度26℃，光照12h。

6.?按照權利要求1所述的一種黃瑞木愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（4）中加入了15%的椰乳，對細胞懸浮培養有促進作用。