[發明專利]促進轉煙草促早花基因NtFT5煙草生根的培養基及獲得短周期煙草的方法

有效

• 申請號: 201410449758.3
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104195097B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 王根洪;夏慶友;王佩;高軍平;熊海軍
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司11275
• 代理人: 王貴君

1.促進轉煙草促早花基因NtFT5煙草生根的培養基，其特征在于：所述生根培養基為含0.1mg/L的NAA、pH為5.6～5.8的1/2MS固體培養基，所述1/2MS為大量元素減半的MS培養基。

2.根據權利要求1所述的促進轉煙草促早花基因NtFT5煙草生根的培養基，其特征在于：所述生根培養基為1/2MS+0.1mg/L?NAA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，調節pH至5.8。

3.利用權利要求1或2所述培養基獲得短周期煙草的方法，其特征在于，包括如下步驟：

A.以SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示序列為引物，煙草cDNA為模板進行PCR擴增，獲得煙草促早花基因NtFT5，將擴增獲得的煙草促早花基因NtFT5連入pCXSN載體Xcm?I酶切位點處，得NtFT5-pCXSN重組質粒；將所得NtFT5-pCXSN重組質粒轉化農桿菌，得含有NtFT5-pCXSN重組質粒的工程菌；

B.將步驟A所得工程菌采用葉盤法轉化煙草，在含1mg/L?6-BA，0.1mg/L?NAA30g/L蔗糖，8g/L瓊脂，pH為5.8的MS培養基上共培養3天，然后在1mg/L?6-BA，0.1mg/L?NAA，250mg/L羧芐青霉素，20mg/L潮霉素，30g/L蔗糖，8g/L瓊脂，pH為5.8的MS培養基上誘導抗性苗，然后利用PCR篩選含有潮霉素基因的植株，得T0代轉NtFT5基因煙草；

C.將步驟B所得T0代轉NtFT5基因煙草在權利要求1或2所述的培養基上生根培養，生根后移栽至泥炭栽培基質中培養至開花、結籽，將獲得的種子萌發后獲得短周期煙草。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟A中，所述PCR擴增的條件為95℃預變性3min；94℃變性30s，54.0℃退火45s，72℃延伸40s，循環35次；最后72℃后延伸10min。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟A中，所述農桿菌為LBA4404。